仪器原理:
含氮有机物与浓硫酸共热,有机物中所含氮转变成氨,并与硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵,用氢氧化钠碱化后,释出氨,随水蒸馏出,用硼酸溶液或定量的酸吸收后,用标准酸液或标准碱液滴定,用空白试验校正。
凯氏定氮蒸馏装置示意图
1.电炉 2.蒸气发生器 3.安全管 4.橡皮管 5.碱液室 6.反应室 7.加样口 8..安全管 9.冷凝管10.接受瓶 11.棒状玻塞12.夹子
1. 定氮仪的构造和安装
蒸汽发生器包括一个电炉(1)及一个3~5升容积的烧瓶(2),蒸汽发生器借橡皮管(4)与反应室相连。反应室上边有二个小烧杯,一个叫加样口(7)上面有棒状玻塞(11)供加样用;一个叫碱液室(5)盛放液。样品和碱液由此可直接到反应室 (6)中。反 应室ZX有一长玻璃管,其上端通到反应室外层,下端靠近反应室的底部。反应室外壳下端底部有一开口,连有橡皮管和管夹 (12),由此放出反应废液。反应所产生的氨可通过反应室上端气液分离器 (8)经冷凝管 (9)通入收集瓶 (10)中。反应室与冷凝管之间由橡皮管相连。
2. 样品的处理
固体样品 随机取一定量研磨细的样品放入恒重的称量瓶中,置于105℃的烘箱中干燥4h用坩锅钳将称量瓶取出放入干燥器内,待降至室温后称重,随后继续干燥样品,每干燥1h,称重一次,恒重即可。
血清样品 取人血(或猪血)放入离心管中,于冰箱中放置过夜。次日离心除去血凝块,上层透明清液,即为血清。吸出1ml血清加到50ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,混匀备用。
3. 消化
取3支消化管并编号,在1、2号管中各加入精确称取的干燥样品0.5~1g,加催化剂6.4g,浓硫酸10ml和2粒玻珠,在3号管中各加相同量的催化剂和硫酸(若样品是液体时,还要加与样品等体积的蒸馏水)作为对照,用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质。摇匀后,将瓶口上放一小漏斗,再把烧瓶斜置铁筐内放在通风厨内的电炉上消化。通常消化需要1~3h(对于那些赖氨酸含量较高的样品需要更长的间)。直到消化液由淡黄色变成清晰的淡蓝绿色,消化即告成功。为了保证消化彻底,再继续加0.5h。消化完毕,取出消化管冷却至室温。加入20ml蒸馏水,无损的转入100ml溶量瓶中,用蒸溜水定容至刻度,混匀,作为试样分解液。
4. 蒸馏
取3个100ml锥形瓶,分别加入2%硼酸20ml,混合指示剂2滴,溶液呈紫红色,用表面皿覆盖备用。 (1) 洗涤、加样:先煮沸蒸汽发生器,器中盛有2/3体积的用几滴硫酸酸化过的蒸馏水,样品杯中也加入2/3体积蒸馏水进行水封。关闭夹子 (12)使蒸汽通过反应室中的插管进入反应室,再由冷凝管下端逸出。在冷凝管下端放一空烧杯以承受凝集水滴。这样用蒸汽洗涤5min左右,在冷凝管下口放一个准备好的盛有硼酸-指示剂的锥形瓶,位置倾斜,冷凝管下口应完全浸泡于液体内,继续用蒸汽洗涤1~2min,观察锥形瓶中的溶液是否基本上不变色,若不变色,则证明蒸馏器内部已洗涤干净。下移锥形瓶,使硼酸液面离开冷凝管口约1cm,继续通蒸汽1min。
(2) 加样前先撤火,务必打开夹子 (12) (这是本实验的关键,否则样品会倒抽到反应室外,准确移取试样分解液10ml,打开样品杯的棒状玻塞,将样品放入反应室,用少量蒸溜水冲洗样品杯后也使之流入反应室,将夹子(12)夹紧。盖上玻塞,并在样品杯中加蒸馏水进行水封。将装有硼酸-指示剂的锥形瓶放在冷凝管口下方,打开存放碱液杯下端的夹子,放10ml 40%氢氧化钠溶液于反应室后,立即上提锥形瓶,使冷凝管下口浸没在锥形瓶的液面下,目的是保证放出的氨全部被硼酸吸收。
5. 滴定
全部蒸馏完毕后,用0.0100mol/L 标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量,直至硼酸-指示剂混合液由绿色变回淡紫色,即为滴定终点。
6. 计算
粗蛋白质= (V2-V1)×c×0.0140×6.25m×V′/V× 式中:
V2——滴定试样时所需标准酸溶液体积(ml)。 V1——滴定空白时所需标准酸溶液体积(ml)。c——盐酸标准溶液浓度(mol/L)。 m——试样质量(g)。
V——试样分解液总体积(ml)。 V′——试样分解液蒸馏用体积(ml)。
0.0140-与1.00ml盐酸标准溶液[c HCl)=1.0000mol/L]相当的、以克表示的氮的质量。 6.25——氮换算成蛋白质的平均系数。
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi