核酸分子杂交及其技术分类的简单介绍

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

一核酸分子杂交概念及原理 概念：核酸分子杂交是根据碱基互补原理，应用已知序列的分子探针检测待测单链核酸片段碱基序列的分子生物学技术，目前广泛应用于分子生物学生物化学病毒检测疾病诊断基因工程等学科领域中 原理：核酸的Walson-Crick碱基互补配对原则（即A=T,GC） 二核酸分子杂交技术的分类 核酸分子杂交技术可按杂交环境分为固相杂交和液相杂交两大类 1固相杂交 固相杂交即先将待测单链核酸样品结合到支持物（常用有硝酸纤维素滤膜尼龙膜化学活化膜等）上，然后与溶液中的已知序列的标记探针进行杂交 固相杂交的特点：固相杂交后，未杂交的游离片段易除去，从而使膜上留下的杂交分子较易检测，并可有效避免靶DNA自我复性故固相杂交技术Z为常用 常用的固相杂交类型有：菌落原位杂交斑点杂交狭缝杂交Southern印迹杂交Northern印迹杂交组织原位杂交和夹心杂交等 2液相杂交 液相杂交是指待测核酸和探针都存在于杂交液中，探针于待测核酸在液体环境中按照碱基互补配对形成杂交分子的过程液相杂交是研究Z早的杂交类型，但应用的普遍程度较固相杂交为低 液相杂交的特点：无需支持物待测核酸分子不用固定在支持物上其弊端是由于杂交后过量的未杂交探针存在于溶液中，在已有杂交结合物检测水平条件下检测误差较高故液相杂交在过去较少应用近年来由于杂交检测技术的不断进步，商业检测试剂盒的开发等液相杂交技术得到了迅速发展 常用的液相杂交类型有：吸附杂交发光液相杂交液相夹心杂交复性速率液相分子杂交 附：原位分子杂交简单介绍 原位分子杂交实际上是固相杂交中的一种形式，杂交过程中待测DNA处于未经抽提的染色体之上，并在原位置上被变性成单链，与探针进行分子杂交 原位分子杂交与其他杂交技术主要区别在于待测碱基序列位于染色体上其主要特点是可以准确定位目的DNA在染色体上的位置因此在分子遗传学研究癌基因定位遗传性疾病临床诊断方面具有重要而广泛应用领成TC-4YY dna分子杂交仪分子杂交箱技术参数