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告诉您制得培养基(牛肉膏蛋白胨)的十大步骤
1称量:按配方比例依次推确地称取牛肉膏蛋白胨NaCL放人烧杯中牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯,也可按在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片
2溶化:在上述烧杯中先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解
3调pH:将成分和琼脂分开灭菌后再混合,或在中性 pH条件下灭菌,再调整 PH
4过滤:趁热用滤纸或多层纱布过滤, 以利某些实验结果的观察
5分装
液体分装:分装高度以试管高度的 l/4 左右为宜
固体分装:分装试管,其装量不超过管高的 1/5,灭菌后制成斜面
半固体分装:试管一般以试管高度的 1/3为宜,灭菌后垂直待凝 6加塞:一只好的棉塞,外形应象一只蘑菇,大小松紧都应适当加塞时的棉塞的总长度的 3/5应在口内,2/5在口外
7包扎:全部试管用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好
8灭菌:将上述以 0.103MPa,121,20min高压蒸气灭菌
9搁置斜面: 将灭菌的试管培养基冷至 50左右,将试管口端捆在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜
10无菌捡查: 将灭菌的放人 37的温室中培养 2448h,以检查灭菌是否彻底
2. 用D-PBS 洗涤细胞一至二次 3.1.3. 加入trypsin-EDTA 溶液1ml/25cm2
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