传统的细胞铺板一般采用手动的有限稀释法来进行,这种方法在需要的操作简单,只需要普通的排枪就能实现,但是效果却很不理想。主要体现在:一致性差,有效孔比例低下,费时间等。
近年来,单抗药物的开发领域又被推上了一个新的高度,越来越多的公司都纷纷投入到这个热潮当中,随之而来的相关法规的要求也是越来越严格。在众多的要求当中,FDA对药物来源的单克隆源性的要求非常严格,这就要求生产和研发的企业在细胞株开发阶段做到严格的单克隆验证。目前市面上已经有几款孔板扫描设备能够得到FDA的认可,他们的数据可以用来作为单克隆源性的证明。在这里我们要讨论的是在验证前的分离阶段,如何快速、准确、GX的获得单细胞。除了上面提到的有限稀释法之外,昂贵的流式细胞分选仪也可以用来作为单细胞铺板工具之一,当然流式除了操作复杂,需要专人维护之外,分选得到的细胞常常复苏比例比较低。在流式分选中,细胞的损伤比较大。
Namocell单细胞分离仪为细胞铺板提供了全新解决方案。该设备采用Zxin的微流体ZL技术能够实现快速,GX,准确的细胞铺板工作。并且分离过程轻柔,不会影响细胞的后续生长。能广泛应用于单抗开发中的CLD环节,以及单细胞测序等。
Namocell单细胞分离用于细胞铺板的原理如下:
将细胞通过一次性的芯片上端加样孔,注入到芯片腔体中。单细胞流在微流控通道中流过激光检测区域,机器能对细胞进行识别,去除掉细胞碎片,死细胞以及状态较差的细胞,使得Z终落到孔板中的细胞都具有很好的活性。高速电子阀门能够极ng确捕获每一个活性细胞,Z终形成1ul体积的液滴,轻柔地落进孔板中。整个过程对细胞的损伤可以忽略不计,所以分选得到的细胞绝大多数的细胞都能再次分裂生长。
整个过程非常快速,一般一块9孔板分选需要1min左右,单个细胞一个孔的比例在85%~90%,一般细胞复苏的比例在40%~65%(复苏比例跟细胞本身有很大关系)。
特点:
快速---一块96孔板1min
GX---单细胞铺板比例近90%
活性---无损分选,高复苏比例
无菌---一次性无菌芯片,可保证无菌分选,并且避免样本交叉污染
Namocell单细胞分离仪细胞铺板有效性
Namocell单细胞分离仪铺板的细胞生长情况
DPN技术的实现过程: 吸附在原子力显微镜(AFM)针尖上的并与基底存在化学作用力的墨水分子,通过凝结
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