饲料中维生素B2的测定
仪器
1). 分析天平一台(精度0.1mg);
2). 恒温水浴锅一台;
3). 容量瓶;
4). 微量进样器(5ul或10µl)一支;
5). 微量可调移液枪(1000ul)一支、吸头多个;
6). 旋涡混匀器一台;
7). LC-10TvpGX液相色谱仪;
试剂
1). 乙二胺四乙酸二钠(EDTA);
2). 庚烷磺酸钠,优级纯;
3). 冰乙酸,优级纯;
4). 三乙胺,色谱纯;
5). 甲醇,色谱纯;
6). 维生素B2标准品:含量≥99%;
7). 维生素B2标准贮备液;
8). 维生素B2标准工作液;
提取液:在已装入约700ml去离子水的1000ml容量瓶中,加入50mgEDTA,待完全溶解后,加入25ml冰乙酸,5ml三乙胺,用去离子水定容到刻度摇匀。
流动相:在已装入700ml去离子水的1000ml容量瓶中,加入50mgEDTA、1.1g庚烷磺酸钠,待全溶解后,加入25ml冰乙酸、5ml三乙胺,用去离子水定容至刻度摇匀。用冰乙酸、三乙胺调解pH至3.4±0.02,过0.45µm滤膜,取该溶液860ml与140ml甲醇混合,超声脱气,待用。
2 试样溶液的制备
称取维生素预混合饲料0.25g-0.5g,于100ml棕色容量瓶中,加入三分之二的提取液于80-100℃水浴中煮沸30min,待冷却后加入14ml甲醇,用提取液定容至刻度,混匀,过滤。维生素预混合饲料样液需由提取液进一步稀释5倍-10倍,取部分过滤液过0.45µm滤膜过滤,GX液相色谱仪分析。
3 色谱条件
色谱柱:Vertex 色谱柱 150mm×4.6mm×5μm;
流速:1.0mlmin;
温度:室温;
进样量:20μl
检测波长:单检维生素B2为267nm,多种维生素联检为280nm。
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