1、提取
10 mL 样品与20 mL 乙腈混合,10000rpm 下均质1 min,4000 rpm 下离心5 min,收集上清液。取15 mL 提取液(相当于5 mL 样品),35℃ 下减压蒸馏除去乙腈,向剩余的水相加入20 mL 磷酸盐缓冲液*,并用0.1 mol/L NaOH 溶液调节pH 8.5,混匀,待净化。
注:0.05 mol/L 磷酸氢二钾溶液,pH 8.5
2、净化
a 活化: 将6 mL 甲醇、6 mL 水依次加入ProElut PLS 500 mg/6 mL (Cat.#68005),流出液弃去;
b 上样: 将待净化的样品液加入柱中*,流出液弃去;
c 淋洗: 依次用3 mL 磷酸盐缓冲液*、3 mL 水淋洗,淋洗液弃去,并将PLS 柱抽干;
d 洗脱: 用6 mL 乙腈洗脱,收集洗脱液;
e 重新溶解:35 oC 下将洗脱液用氮气吹干,然后用0.05 mol/L 磷酸盐缓冲溶液(pH 7.0)定容至1 mL,微孔滤膜过滤后,LC-MS/MS 分析
注:样品体积大于柱容积,需分次上样或在PLS 柱上安装60 mL 储液管 (Cat.#4812),适配器 (Cat.#4803) ;0.05 mol/L 磷酸氢二钾溶液,pH 8.5。
流动相:缓冲溶液+ 乙腈,梯度
流速:1.0 mL/min
进样量:20 μL
柱温:30 ℃
检测器:串联质谱,ESI+,MRM 模式检测
适用于牛奶中羟氨苄青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素等青霉素类药物的检测。
1. 羟基苄青霉素;2. 氨苄青霉素;3. 甲氧苯青霉素;4. 苄青霉素;5. 苯氧甲基青霉素;6. 苯唑青霉素;7. 苯氧乙基青霉素;8. 邻氯青霉素;9. 乙氧萘青霉素;10. 双氯青霉素
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