样品准备
(1) 取1 g样品于50 mL离心管中,加入10 mL提取液 *,均质1 min, 6000 rpm下离心2 min,收集上清液;
(2) 残渣再用10 mL 提取液 *涡旋混合提取2 min,6000 rpm下离心2 min;合并两次提取液;
(3) 在40 ℃下用减压蒸馏将提取液蒸干,然后用6 mL 1%磷酸水溶液超声溶解,待净化。
*提取液:三氟乙酸/乙腈=2/98
SPE柱净化——ProElut PXC 200 mg/6 mL(Cat.#:68212)
(1)活 化:依次加入5 mL甲醇、5 mL水,流出液弃去;
(2)上 样:将待净化液加入小柱,流出液弃去;
(3)淋 洗:依次加入5 mL水、5 mL甲醇,流出液弃去;
(4)洗 脱:加入6 mL 5%氨水甲醇溶液,收集流出液;
(5)重新溶解:在40 ℃下用减压蒸馏将收集的流出液蒸干,然后用50%甲醇水溶液定容至1 mL后供HPLC分析。
色谱柱:Diamonsil C18(2) 250×4.6 mm,5 μm(Cat.#:99603)
流 速:1.0 mL/min
检测器:激发波长:550 nm
发射波长:580 nm
柱 温:30 ℃
进样量:10 μL
流动相:甲醇:水 = 75:25
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