测定饲料中的地西pan——固相萃取-液相色谱法

前言

地西pan别名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓，主要用于人和动物镇定催眠及癫痫的ZL。由于，地西pan添加到饲料中可以提高动物的生长速度和减少饲料用量，故部分养殖企业为谋取更多效益，在饲料中非法添加地西pan，我国农业部与质量监察部门已经严格禁止在饲料中添加地西pan。地西pan具有蓄毒性，在饲料中长期添加，会导致其在肌肉组织中富集，从而进一步危害消费者健康，所以建立一种GX、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对饲料中的地西pan进行固相萃取富集，用GX液相色谱仪进行检测。

本文参考《T/CFIAS003-2019 饲料中地西pan的测定GX液相色谱法》采用SPE1000全自动固相萃取系统，测定地西pan的回收效果，实验证明，地西pan回收率在86.8%~99.4%之间，重现性RSD为5.9 %，回收率和重现性良好，说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠、稳定，适用于饲料中的地西pan样品前处理。

1、实验过程

1.1仪器与试剂

SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

LC600高压GX液相色谱仪（莱伯泰科公司）；

地西pan，1000mg/L，坛墨质检；

甲醇（色谱纯）；

甲酸（分析纯）；

氨水（分析纯）；

PCX混合型阳离子交换柱，（60mg/3mL莱伯泰科）；

实验用水：超纯水。

1.2 标准工作液的配置

取1mL地西pan标品于10mL容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为100μg/mL的标准储备液。

取20μL 的标准储备液，用甲醇定容到1mL，配制成2 μg/mL标准工作液。

1.3 实验方法

1.3.1 样品制备

将饲料样品打碎，称取2.0g样品，加入400μL的标准工作液，使饲料中地西pan的加标浓度为0.4mg/kg，加入20mL乙腈，涡旋5min，超声20min，5000rad/min离心10min,取5mL上清液,待固相萃取处理。同时做样品空白。

1.3.2 固相萃取及浓缩

按照图1所示的方法进行SPE1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，氮吹浓缩至1mL以下，甲醇定容至1mL，待测。

图1   地西pan的SPE富集方法

1.3.3 HPLC测定水中地西pan

色谱柱：C18，5μm，4.6nm*150mm；

波    长：230nm；

流    速：1.0mL/min ；

进样量：20μL；

流动相：甲醇：水=65:35V/V

2、实验结果

2.1  地西pan色谱图

2.1.1地西pan标品色谱图

图2为取100μL的标准工作液，用甲醇：水（8:2）定容到1.0mL检测（200μg/L），地西pan标品出峰色谱图，出峰时间为11.88min。

图2  地西pan标品出峰色谱图

2.1.2饲料中地西pan加标样品色谱图

图3地西pan加标样品出峰色谱图，出峰时间为11.90min。 

图3  地西pan加标样品出峰色谱图

2.1.3饲料中地西pan样品色谱图

图4为空白样品色谱图。

图4  空白样品色谱图

2.2 HPLC测定饲料中地西pan回收率

HPLC测定饲料中地西pan回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率在86.8% ~99.4% 之间，重现性RSD为5.9%。

表1  饲料中地西pan的加标回收率（加标量0.4mg/kg）

3、实验结论

1、254nm和230nm的波长均可检测到地西pan，但地西pan在230nm波长下，信号响应ZG。

2、SPE1000全自动固相萃取系统净化的样品，其回收率和重现性良好，工作效率高，可应用于此类样品的前处理方法中。

4、参考标准

T/CFIAS003-2019饲料中地西pan的测定GX液相色谱法