这篇由云南师范大学化学化工学院的研究学者完成,讨论脂肪酶生物印迹与交联的研究的论文,发表在重要期刊《工业催化》上。
该文以脂肪酶为印迹对象,首先对脂肪酶进行了生物印迹,然后对印迹的脂肪酶进行了乙 酰化和交联,用三硝基苯磺酸( TNBS)法检测酰化和交联的程度。结果表明,酰化和交联后游离氨 基数减少,说明有部分氨基参与了乙酰化,使印迹酶的交联成为可能,同时交联酶结构稳定、不易失活、活性明显高于乙酰化酶。
图1/2↑
图2/2↑
结论
通过本实验发现交联印迹能降低酶的柔韧性,提高酶的刚性,增加酶对温度的耐受能力,同时交联―印迹酶活性明显高于乙酰化酶,推测可能是交联印迹后酶的构象被固定,结构稳定、不易失活,从而使交联―印迹酶的酶促反应速率大大加快。
15 mg 脂肪酶溶于0.5 mL 己烷溶液中,振荡得悬液,在悬液中依次加入 0.25 mL 交联剂 EDMA 和 4 mg 引发剂偶氮二异 丁 腈(AIBN),在4℃,366 nm 紫外光照5 h,使其发生共聚作用。用 0.5 mL 己烷洗涤共聚物 3 次,ZH将交联印迹酶真空干燥 2 小时,即得交联印迹酶(CLIE)。
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