一、样品提取
准确移取饲料 1.0 g 于 50 mL 离心管中加入 25 mL 乙腈,涡旋 1 min 分散均匀,65℃超声提取 15 min,每隔 5 min 手摇一次。 3800 r/min 离心 15 min。取上清液 5 mL 于 100 mL 鸡心瓶中, 50℃旋转蒸发至干。往鸡心瓶中加 2% 甲酸水溶液 5 mL,超声 2 min,涡动 1 min 充分溶解,备用。
二、SPE 柱净化(Copure® MCX,60 mg/3 mL)
活化:MCX 固相萃取柱使用前用 3 mL 甲醇、3 mL 2% 甲酸水溶 液活化。
上样和洗脱:往固相萃取柱中加入 2% 甲酸水溶液提取备用 液,弃去流出液;加入 3 mL 水淋洗,弃去淋洗液 3 mL 固 相萃取柱洗脱液(1% 氨水溶液:甲醇 =3:7)洗脱收集洗脱 液 ( 整个上样淋洗洗脱过程中流速控制在 1 mL/min 以内 )。
重新溶解:50℃缓慢氮气流条件下吹至近干,加 1 mL 流动相 复溶,0.22 µm 滤膜过滤,滤液上机测试。
三、仪器条件
设 备:Waters Alliance 2695 色谱柱:XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器:Waters 2487 紫外检测器 检测波长:365 nm 流动相:A:乙腈 B:0.05% 乙酸铵溶液 洗脱方式:梯度洗脱,见表 1
表 1 流动相梯度洗脱程序
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