双特异性抗体是含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体,能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁,激发具有导向性的免疫反应,是基因工程抗体的一种,现已成为抗体工程领域的热点,在肿瘤的免疫治 疗中具有广阔的应用前景。
双特异性抗体药物具有浓度低及药效显著的特点,传统紫外-可见分光光度法只能准确检测A280nm,在0.3~0.7范围的蛋白浓度,无法准确测定低浓度蛋白样品。
本次分享的应用中,作者采用了TSKgel G3000SWXL凝胶色谱柱建立了测定低浓度双特异性抗体药物浓度方法[1],该方法同时也适合于中、高浓度药物浓度检测。
分析条件
色谱柱:TSKgel G3000SWXL (7.8 mmI.D.×30 cm, 5μm)
流动相:0.1 M磷酸氢二钠+0.1 M硫酸钠(磷酸调节pH到6.7)
流速:0.8 mL/min
进样体积:100 μL
柱温:25℃
检测器参数:UV@214 nm
分析结果
图1 (A)流动相、(B)氯化钠注射液、(C)制剂缓冲液、(D)0.01 mg/mL对照品及(E)系统残留色谱图叠加
图2 峰面积与浓度线性关系图
结果与讨论
采用TSKgel G3000SWXL建立的双特异性抗体浓度测定方法, 分离谱图见图1,在对照品出峰时间处无可见干扰峰,表明方法专属性良好。图2是线性考察结果,在浓度范围0.01~0.32 mg/mL范围内,峰面积与样品浓度,线性关系良好 (R2=1.00),平均回收率在90.0%~110.0%之间,表明该方法准确度良好。
该方法使用的流动相无有机溶剂,属于非变性色谱流动相条件,可保证抗体药物分子不会发生变性,相对反相色谱方法更有优势。方法操作简单、快速,为抗体药物的有效性和安全性评价提供了可靠的浓度检测方法。
参考资料:
1. 廉开礼;崔岩;彭伟;曹宇;刘忠;张贵民,赵丽丽,分子体积排阻高效液相色谱法测定低浓度重组人源化抗BCMA/CD3双特异性抗体药物的浓度. 药物分析杂志. 2020,40(8): 1365-1370
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摘要:哈尔滨医科大学附属二院药学部,哈尔滨市150086 中图分类号:R97文献标志码:A文章编号:1001
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