前言
黄曲霉毒素M族是一类由黄曲霉(Aspergillus flavus)和黄秆孢(Aspergillus parasiticus)真菌产生的毒素,黄曲霉毒素M族包括多种互为异构体的毒素,其中Z常见的是黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1),它是在动物体内经过代谢后形成的衍生物,是一种非常强的致癌物质,长期摄入可能导致肝脏损伤、肝癌等健康问题。黄曲霉毒素M1主要存在于牛奶及其制品中,因为受污染的饲料中也可能含有黄曲霉毒素,导致牛奶中出现残留物质。因此,在食品安全方面需要加强监管和控制,以避免人们因摄入受污染的食品而受到危害。
GB 5009.24-2016第二法中规定了液相色谱法对黄曲霉毒素M族的测定条件,通常来说M族测定的难点在于低浓度点的检测灵敏度及重复性较差,所以对于仪器本身的要求就会变得很高,本文采用了SCION LC6000 6440超高灵敏度荧光检测器,采用先进的光路设计,结合小体积流通池和单色器可变狭缝,提供了超高的灵敏度(水拉曼峰的S/N≥3000),M1、M2检出限可达0.03、0.01ng/mL。
实验部分
仪器
采用包含以下模块的赛里安LC6000高效液相色谱仪系统:
集成六通道真空脱气的SCION LC6100四元泵
SCION LC6210 高精度、低残留自动进样器
SCION LC6310 柱温箱
SCION LC6440 荧光检测器(超高灵敏度,水拉曼峰S/N>3000)
试剂及标准品
AFT M1和 AFT M2的浓度均为0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL的系列标准溶液,乙腈-水溶液,乙腈-甲醇溶液。
液相色谱条件
表1. 方法参数
图1. 黄曲霉毒素M1、M2重复性谱图
表2. 黄曲霉毒素M1、M2定量定性
标准曲线
将黄曲霉毒素M1和M2标准溶液依次稀释为0.05、0.1、0.5、1、2、5ng/ml,使用外标法进行标准定量 ,以浓度为横坐标峰面积为纵坐标作外标工作曲线 ;M1、M2响应值和浓度呈良好的线性关系,所得到的相关系数均在0.999以上,见 图 1 、图 2 。
图2. 黄曲霉毒素M1标准曲线
图3. 黄曲霉毒素M2标准曲线
检出限
黄曲霉毒素M1、M2检出限为0.03ng/ml、0.01ng/ml,见图4、图5。
图4. 黄曲霉毒素M1检出限
图5. 黄曲霉毒素M2检出限
结论
本文使用赛里安超高灵敏度荧光检测系统快速分析M族黄曲霉毒素,该方法配置合理、线性良好、分离效果好、灵敏度高,可以满足并优于国家标准GB5009.24-2016食品中黄曲霉毒素M族的测定要求。
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