- 单细胞分选 单细胞分选免疫磁珠法
免疫磁珠细胞分选方法可以在几分钟内从复杂的细胞混合物中分离出很高纯度的细胞。
磁分离细胞的重要指标是:
磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小决定了细胞分选的纯度和得率,但是若磁珠太小,则不会有很高的得率,若磁珠太大,则又会对细胞活性产生影响,流式也不能直接上。
目前,在市场上有Small particles (≈50 nm)和MACS Large particles (1200~4500 nm) -others两种磁性细胞分离系统。
大磁珠
优点:
技术简单,能够在试管中完成分离,细胞用量的增减很容易,不仅有很高的速度以及很高的得率,而且成本也非常低廉。
缺点:
对细胞有机械压力,会对其生物学活性产生影响,对分离后培养非常不利,具有比较低的纯度,使FCM的喷嘴阻塞了。
小磁珠
优点:
对细胞温和,分离细胞的后续培养不会受到影响,能够直接上流式检测,不会对散射光产生影响。
缺点:
分离细胞需要很强的磁场,分离的细胞得率比较低且速度不快,在普通试管不能进行,需要一次性的分离柱,需要较为昂贵的成本。
免疫磁珠法分类
免疫磁珠法包括正选法和负选法两种方法:
负选法
磁珠对不需要的细胞进行结合,所需细胞即为游离于上清液的细胞。
正选法:
分离获得的细胞即是磁珠结合的细胞。
通常来说,正选法磁珠的用量要小于负选法。
免疫磁珠法分离细胞原理:
免疫磁珠法分离细胞是以细胞表面抗可以和连接有磁珠的特异性单抗相结合为基础,在外加磁场的作用下,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而在磁场中滞留,没有此种表面抗原的细胞因为不可以和连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不能够停留在磁场中,从而分离出细胞。
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