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本生阐述:elisa操作步骤说明及注意事项
酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA),指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。要知道elisa操作步骤首先我们先了解一下elisa的原理是什么。
elisa的原理:
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性, 又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体 上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物, 产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据焰色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到 很高的敏感度。
elisa操作步骤:
方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越 强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则 410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
方法二 用于检测未知抗体的间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日 洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔 中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体
以上是elisa操作步骤,那么在elisa操作步骤的操作步骤中需要注意什么呢?下面是elisa实验的注意事项:
1.正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2.在elisa操作步骤中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:固相载体的选择、包被抗体(或抗原)的选择、酶标记抗体工作浓度的选择、酶的底物及供氢体的选择
elisa试剂盒 本生(天津)健康科技有限公司是一家从事健康科技技术开发销售的公司,本生生物公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准。本生(天津)健康科技有限公司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成,于为生命科学研究域提供产品,为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求,也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。
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- 台式电导率仪测定水样详细步骤说明
台式电导率仪测定水样详细步骤如下:
1、用待测水样清洗电极,然后倒掉;
2、重复步骤1,至少清洗电极两遍;
3、再取待测水样,将电极插入烧杯,等待测量值稳定(约30秒左右);
4、当判稳指示显示稳定后,即可读出测量值。
台式电导率仪使用注意事项
1、如果水样的电导率值较大,电极清洗两遍即可;如果电导率值较小,建议多洗几遍电极,很大限度地减小干扰,以便获得更加准确的测量值。
2、严格禁止超限测量。如果水样的电导率超过所使用电极的测量范围,将会引起电极极化,使电极测量精度下降,导致电极失效。
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- 气相色谱仪原理、结构及操作
1、基本原理
气相色谱(GC)是一种分离技术。实际工作中要分析的样品往往是复杂基体中的多组分混合物,对含有未知组分的样品,首先必须将其分离,然后才能对有关组分进行进一步的分析。混合物的分离是基于组分的物理化学性质的差异,GC主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离。待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体(即载气,一般是N2、He等)带入色谱柱,柱内含有液体或固体固定相,由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同,每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。但由于载气是流动的,这种平衡实际上很难建立起来,也正是由于载气的流动,使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解附,结果在载气中分配浓度大的组分先流出色谱柱,而在固定相中分配浓度大的组分后流出。当组分流出色谱柱后,立即进入检测器,检测器能够将样品组分的存在与否转变为电信号,而电信号的大小与被测组分的量或浓度成比例,当将这些信号放大并记录下来时,就是如图2所示的色谱图(假设样品分离出三个组分),它包含了色谱的全部原始信息。在没有组分流出时,色谱图的记录是检测器的本底信号,即色谱图的基线。
2、气相色谱结构及维护
2.1进样隔垫
进样隔垫一般为硅橡胶材料制成,一般可分普通型、优质型和高温型三种,普通型为米黄色,不耐高温,一般在200℃以下使用;优质型可耐温到300℃;高温型为绿色,使用温度可高于350℃,至色谱柱Z多使用温度的400℃。正因为进样隔垫多为硅橡胶材料制成,其中不可避免地含有一些残留溶剂和/或低分子齐聚物,另外由于汽化室高温的影响,硅橡胶会发生部分降解,这些残留的溶剂和降解产物如果进入色谱柱,就可能出现“鬼峰”(即不是样品本身的峰),从而影响分析。解决的办法有:一是进行“隔垫吹扫”,二是更换进样隔垫。
一般更换进样隔垫的周期以下面三个条件为准:(1)出现“鬼峰”;(2)保留时间和峰面积重现性差;(3)手动进样次数70次,或自动进样次数50次以后。
2.2 玻璃衬管
气相色谱的衬管多为玻璃或石英材料制成,主要分成分流衬管、不分流衬管、填充柱玻璃衬管三种类型。衬管能起到保护色谱柱的作用,在分流/不分流进样时,不挥发的样品组分会滞留在衬管中而不进入色谱柱。如果这些污染物在衬管内积存一定量后,就会对分析产生直接影响。比如,它会吸附极性样品组分而造成峰拖尾,甚至峰分裂,还会出现“鬼峰”,因此一定要保持衬管干净,注意及时清洗和更换。
玻璃衬管清洗的原则和方法
当以下现象:(1)出现“鬼峰”;(2)保留时间和峰面积重现性差出现时,应考虑对衬管进行清洗。清洗的方法和步骤如下:(1)拆下玻璃衬管;(2)取出石英玻璃棉;(3)用浸过溶剂(比如丙酮)的纱布清洗衬管内壁。 玻璃衬管更换时要注意玻璃棉的装填:装填量3~6mg,高度5~10mm。要求填充均匀、平整。
2.3 气体过滤器
变色硅胶可根据颜色变化来判断其性能,但分子筛等吸附有机物的过滤器就不能用肉眼判断了,所以必须定期更换,一般3个月更换或再生一次。
由于分流气路中的分子筛过滤器饱和或受污严重,就会出现基线漂移大的现象,这个时候就必须更换或再生过滤器了。再生的方法是:(1)卸下过滤器,反方向连接于原色谱柱位置。(2)再生条件:载气流速40~50ml/min,温度340℃,时间5h。
2.4 检测器
如果说色谱柱是色谱分离的心脏,那么,检测器就是色谱仪的眼睛。无论色谱分离的效果多么好,若没有好的检测器就会“看”不出分离效果。因此,高灵敏度、高选择性的检测器一直是色谱仪发展的关键技术。目前,GC所使用的检测器有多种,其中常用的检测器主要有火焰离子化检测器(FID)、火焰热离子检测器(FTD)、火焰光度检测器(FPD)、热导检测器(TCD)、电子俘获检测器(ECD)等。下面对检测器的日常维护作简单讨论:
2.4.1火焰离子化检测器(FID)
(1) FID虽然是准通用型检测器,但有些物质在检测器上的响应值很小或无响应,这些物质包括yongjiu气体、卤代硅烷、H2O、NH3、CO、CO2、CS2、CCl4,等等。所以检测这些物质时不应使用FID。
(2)FID的灵敏度与氢气、空气、氮气的比例有直接关系,因此要注意优化,一般三者的比例应接近或等于1∶10∶1。
(3)FID是用氢气在空气燃烧所产生的火焰使被测物质离子化的,故应注意安全问题。在未接上色谱柱时,不要打开氢气阀门,以免氢气进入柱箱。测定流量时,一定不能让氢气和空气混合,即测氢气时,要关闭空气,反之亦然。无论什么原因导致火焰熄灭时,应尽量关闭氢气阀门,直到排除了故障重新点火时,再打开氢气阀门。
(4)为防止检测器被污染,检测器温度设置不应低于色谱柱实际工作的Z强温度。检测器被污染的影响轻则灵敏度明显下降或噪音增大,重则点不着火。消除污染的办法是对喷嘴和气路管道的清洗。具体方法是:断开色谱柱,拔出信号收集极;用一细钢丝插入喷嘴进行疏通,并用丙酮、乙醇等溶剂浸泡。
2.4.2 火焰热离子检测器(FTD)
FTD使用注意事项:
(1) 铷珠:避免样品中带水,使用寿命大约600~700h;
(2) 载气:N2或He,要求纯度99.999%。一般He的灵敏度高;
(3) 空气:建议是选钢瓶空气,无油;
(4) 氢气:要求纯度99.999%。
另外需要注意的是使用FTD时,不能使用含氰基固定液的色谱柱,比如OV-1701。
2.4.3火焰光度检测器(FPD)
FPD使用注意事项:(1) FPD也是使用氢火焰,故安全问题与FID相同;
(2) 顶部温度开关常开(250℃);
(3) FPD的氢气、空气和尾吹气流量与FID不同,一般氢气为60~80ml/min,空气为 100~120ml/min,而尾吹气和柱流量之和为20~25ml/min。分析强吸附性样品如农药等,中部温度应高于底部温度约20℃;
(4) 更换滤光片或点火时,应先关闭光电倍增管电源;
(5) 火焰检测器,包括FID、FPD,必须在温度升高后再点火;关闭时,应先熄火再降温。
2.4.4热导检测器(TCD)
TCD使用注意事项:
(1)确保热丝不被烧断。在检测器通电之前,一定要确保载气已经通过了检测器,否则,热丝就可能被烧断,致使检测器报废;关机时一定要先关检测器电源,然后关载气。任何时候进行有可能切断通过TCD的载气流量的操作,都要关闭检测器电源;
(2)载气中含有氧气时,热丝寿命会缩短,所以载气中必须彻底除氧;
(3)用氢气作载气时,气体排至室外;
(4)基线漂移大时,要考虑以下几个问题:双柱是否相同,双柱气体流速是否相同;是否漏气; 更换色谱柱至检测器的石墨垫圈。 池体污染; 清洗措施:正己烷浸泡冲洗。
2.4.5 电子俘获检测器(ECD)
ECD使用注意事项:
(1) 气路安装气体过滤器和氧气捕集器; 氧气捕集器再生:
(2) 使用填充柱时也需供给尾吹气(2~3ml/min);
(3) 操作温度为250~350℃。无论色谱柱温度多么低,ECD的温度均不应低于250℃, 否则检测器很难平衡。
(4) 关闭载气和尾吹气后,用堵头封住ECD出口,避免空气进入。
3、基本操作
3.1 加热
由于气相色谱仪的生产厂家和质量的不同.测定温度的方式也不相同 对于用微机设数法或拨轮选择法给定温度.一般是直接设数或选择合适给定温度值加以升温.而如果是采用旋钮定位法.则有技巧可言
3.1.1过温定位法
将温控旋钮调至低于操作温度约30℃处 给气相色谱仪升温 当过温至约为操作温度时.配台温度指示和加热指示灯.再逐渐将温控旋钮调至台适位置
3.1.2 分步递进定位法
将温控旋钮朝升温方向转动一个角度.升温开始.指示灯亮:当温度基本稳定时 再同向转动温控旋钮.开始继续升温:如此递进调节、直至恒温在工作温度上.
3.2 调池平衡
调池平衡 实际是调热导电桥平衡.使之有较为台适的输出 讲调节技巧.其实是对具有池平衡、调零和记录调零等
第1步.用池平衡或调零旋钮将记录仪指针调至台适位置;
第二步.自衰减至l6倍左右.观察记录仪指针移动情况;
原文地址:http://www.easylabplus.com/index-news-describe-html-973.html
- 肉色测定仪OPTO-STAR操作步骤与说明
肉色测定仪OPTO-STAR操作步骤与说明其实非常的简单,只要细心的阅读就能掌握操作步骤,首次实用肯定的手忙脚乱的,多操作几次就能熟能生巧,然而有很多的用户拿到仪器之后就盲目的进行操作,其实是错误的做法,不论是什么样的产品首次使用都要掌握操作步骤和流程在进行操作,不然会造成没有必要的错误。
1、电源键开关:
仪器在用完后需要切断电源。当系统被切断后,所有的数据以及设置都预先被自动保存下来。
2、测量键:
系统打开后,该项就会显示。并且按下“ENT”键后,测量就会立即执行。按下“FNC”键后,立马可以回到主菜单上的该项功能。
3、校准键
测量之前,有必要先检查校准功能。由于漂变功能的缺失或探头的老化,在正常的环境条件下,重新校准没有必要。
在测量程序中,可以使用校正集成模块来模拟肉质测量。将传感器调到色值“0”处,之后离开三秒。色值显示调到零。如果接近0(+1/-1),系统能识别这一集成模块。
按下“ENT”键。将传感器调到色值“90”处,步骤与调零一样。做完这些后,如果校准正常,系统检查可行性并且自动跳到“测定”项。
4、CONFIC键
不需要激活
5、SYSTEM键
该菜单项可以检查某一系统数据。按“ENT”键可以翻到下一屏(见菜单结构表)。用户可以完全将缓冲液的值清除掉。
时间/日期。
6、CLOCK键
时间与日期在这里进行专门设置。对年/月/日以及小时/分钟设置区域均单独划分开。日期与时间在“系统”菜单项中进行检查。
7、测量ENT键:
将 “OPTO”传感器插入到肉质中。按下“ENT”确定测量的值。
8、手柄上的开/关键:
这个键能够使仪器处于开关状态。在校准过程中已经取得的数据以及用户输入的数据在开关被关之前,OPTO-STAR能够保存下来。当仪器再次开的时候,近一次的设置可以继续使用。如果保存
下来的数据不能被读取(例如:Z开始的操作),仪器就会显示一条消息告诉用户仪器需要进行校准。“CALIB”一般指示仪器功能紊乱。
9、FNC键
按下这个键,可以在任何时候回到主菜单。
10、Cursor键(上下箭头)
这些键能够通过菜单滚动屏幕。在数据输入过程中,屏幕上显示的值能够被修改。
Cursor 向下”(向下箭头) :显示下一页的菜单项(见菜单结构表)。不能通过菜单循环键进行滚屏;当Z后一项菜单显示的时候,“Cursor 向下”键就不再起作用。如果要修改数字,按
“Cursor 向下”键可以以每单位降低所要修改的数字。
“Cursor 向上”(向上箭头) :显示上一页的菜单项;以每单位升高所要修改的数字。
11、ENT键
执行屏幕上所显示内容的功能。当输入的数据时,屏幕显示的是当前输入的数据。当按下ENT”键后,所有的信息和需要检查的数据会出现在屏幕上。
通过“FNC”键,任何时候可以回到主菜单对需要检查的项进行校正,如果工作电压偏低,屏幕上会显示“BATT LOW”。此时。唯yi可以选择的项是“SYSTEM”,显示的是系统日期。
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- 紫外老化试验箱:基本原理及操作步骤
紫外老化试验箱是一种用于模拟自然环境中的紫外线、湿度和温度对材料老化影响的设备。它被广泛用于研究材料的耐久性、性能和可靠性,是产品质量控制和研发过程中不可或缺的实验设备。
紫外老化试验箱通常由箱体、紫外灯、控温系统、湿度控制系统和样品旋转系统等组成。箱体用于容纳样品,紫外灯用于模拟太阳光中的紫外线,控温系统用于控制试验温度,湿度控制系统用于控制试验湿度,样品旋转系统用于使样品均匀受到紫外线的照射。
操作紫外老化试验箱的步骤如下:
准备样品:将需要测试的材料制作成标准样件,并清洗干净。
设置试验参数:根据测试需求,设置试验温度、试验湿度和紫外灯的照射时间等参数。
将样品放入试验箱:将准备好的样品放入试验箱中,确保样品均匀受到紫外线的照射。
开启试验箱:开启试验箱的电源,启动试验。
定期观察样品的的变化:在试验过程中,需要定期观察样品的颜色变化、性能变化等,记录实验数据。
结束试验:达到设定的试验时间后,关闭试验箱的电源,结束试验。
使用紫外老化试验箱时需要注意以下事项:
注意安全:试验过程中,需要避免手伸入试验箱中,以防烫伤或者紫外线过度照射伤害皮肤。
保养设备:定期清洗试验箱内部,更换滤网,保持设备的良好运行状态。
正确使用设备:根据设备操作手册进行操作,避免误操作导致设备损坏或者样品测试结果不准确。
在使用紫外老化试验箱的过程中,可能会遇到一些问题,例如紫外灯不亮、控温系统失灵等。对于这些问题,可以参考设备操作手册或者联系设备生产商进行解决。
紫外老化试验箱具有模拟自然环境老化的作用,可以有效地检测材料的耐久性、性能和可靠性。但是,由于设备的价格较高,维护成本也较高,因此需要在购买和维护设备时进行综合考虑。
总之,紫外老化试验箱是一种重要的材料老化测试设备,可以有效地帮助研究人员了解材料的性能和可靠性。在使用设备时,需要注意安全和设备的保养,同时正确使用设备,避免误操作对设备造成损坏或者影响测试结果的准确性。
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