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斑马鱼身体延长而略呈纺锤形，头小而稍尖，吻较短，全身布满多条深蓝色纵纹似斑马，与银白色或金黄色纵纹相间排列纹路比较有条理。在水族箱内成群游动时犹如奔驰于非洲草原的斑马群，故此得斑马鱼之美称。斑马鱼和人类基因有着87%的高度相似性，作为模式生物的优势很突出，这意味着其实验结果大多数情况下适用于人体，常可用于水质环境的监测。

近期有位客户需要一台体视荧光显微镜用于斑马鱼研究，明美销售经理推荐体视荧光显微镜MZX81搭配显微镜相机MC50-S.

体视荧光显微镜MMZX81搭配显微镜MC50-S拍摄的斑马鱼

体视荧光显微镜MZX81采用优异的无限远平行光路系统，LED荧光双光路照明设计，性能优越，是应用于动物活体成像；果蝇属的分类、荧光幼虫及麻醉成虫的筛选；线虫有动能个体的鉴定筛选；以及斑马鱼、小鼠和鸡胚胎的鉴定及胚胎观察等研究的理想工具。

如果您对斑马鱼体视荧光显微镜感兴趣或有疑问，欢迎与我们联系，期待与您相约！

来源：http://www.mshot.com.cn/kehuanli/20220929.html，转载请保留出处，谢谢！

倒置荧光显微镜应用于斑马鱼切片观察

斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，而且斑马鱼幼鱼通体透明，容易观察到毒性表型。近期，明美江苏区域安装倒置荧光显微镜MF52-N搭配1250万像素显微镜相机MSX2，用于斑马鱼不同层面切片观察。

倒置荧光显微镜MF52-N支持明场、相衬和荧光观察，从切片中可见，正常对照组织结构规则，细胞形态完整，细胞质均匀，细胞核呈规则圆形。

斑马鱼染色切片 72-96hpf

斑马鱼观察一般包括总体成像和切片观察，通常需要体视显微镜和生物显微镜搭配。倒置显微镜可以直接观察培养皿中的斑马鱼，搭配采用五孔物镜转盘、高分辨率、长工作距离物镜和高灵敏度相机，能很好地满足斑马鱼成像的挑战。

倒置荧光显微镜MF52-N采用数显LED荧光模块，可提供简单易用的荧光激发和高质量相衬、荧光和明场成像。广泛应用于细胞培养、生物制药、医疗检测等领域。

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来源：https://www.mshot.com/article/1713.html

老师此前买过明美体视显微镜MZ62，目前通过三目镜筒连接显微镜相机与图像系统，实现对镜下成像的保存、分析等。老师想重新购买一套数码体视显微镜，要求达到发表论文的水平，主要是用来观察基因敲除观察斑马鱼体色，对斑马鱼体色的影响从而推导某个基因突变

解决方案：

明美工程师通过参加厦门大学仪器巡展，老师现场看到明美的仪器的体视显微镜MZ62和显微镜相机MSX1，现场沟通后需求确切，马上就进行样机试用，效果理想！明美显微镜MSX1是1000万高分辨率显微相机，内置硬件ISP图像处理芯片，细节处理和色彩还原，高效数据处理，全分辨下可达到36fps

【本文的标题和网址】明美显微镜相机应用于厦门大学环境与生物工程斑马鱼观察；https://mshot.com/article/754.html

前言

斑马鱼与哺乳动物基因组和蛋白调控机制有高度同源性，而且个体小、生殖周期短、繁殖能力强、易于饲养、体外受精、胚胎透明且发育迅速等诸多方面的优点，被广泛应用于药物筛选、毒性检测和发育研究等科学领域。由于硬骨鱼和人类在骨骼发育过程中的基因、信号通路有高度同源性，而且与其他的动物模型相比，斑马鱼具有个体小适合高通量化学筛选、身体透明易于观察骨骼发育的特定，所以近年来斑马鱼为模型的骨骼研究逐渐成为这一领域的热点

结尾：

利用一定造模手段，使得斑马鱼的脊椎骨发生基因突变。由于外形上是看不出突变的形状，需Micro CT扫描并重建，通过观察斑马鱼的脊椎骨突变后的具体形态，来判断造模是否符合预期。在研究骨骼形态的同时，也可以对骨骼的骨密度、肌肉和脂肪的比例进行研究。在Micro-CT助力下，以斑马鱼为疾病模型的研究会有越来越多的突破！

我司广州明慧公司代理的耐可视电动研究倒置荧光显微镜NIB950FL助力对斑马鱼的研究工作，采用高速电动控制，将复杂的操作简单化，可视化，操作更加轻松简易。不仅仅提高研究人员的工作效率，更减少了细胞的曝光时间，减少光毒性，获得的实验结果更加准确有价值。
【实验/设备条件】
实验室工作台
【样品提取】
培养好的活体斑马鱼
【实验/操作方法】
研究人员通过电动荧光显微镜，高速电动控制，分析图像，监控记录斑马鱼的形态发育研究工作，培养活体斑马鱼。
【实验结果/结论】
倒置荧光显微镜和电动控制平台组成，通过高速电动控制，快速简便；大功率LED荧光光源与市面上常用的荧光染料匹配性高，激发能量更集中，较进口知名品牌荧光更强。实验结果达到了实验人员的研究要求，达到进口的同等次荧光显微镜的研究水平，确保了其最佳的采集方式，推进实验人员的研究进程，以及实验后可以满足研究的成果展示。
【仪器/耗材清单】
倒置荧光显微镜NIB950FL+电动控制平台+大功率LED荧光光源MH-400-LED
【场景图/实拍效果图】

    近期，斑马鱼（北京）科技有限公司与10x Genomics达成合作协议，斑马鱼（北京）科技有限公司成为10x Genomics的授权代理商，由斑马鱼公司在授权区域内推广销售10x Genomics仪器和试剂，并共同负责区域内售后服务工作。

Chromium Connect代理区域：北京、天津、河北、内蒙古、山西、河南、陕西、甘肃、青海、宁夏、新疆、黑龙江、吉林、辽宁。

    Chromium Connect是10x Genomics推出的全.球首.款自动化单细胞测序建库工作站，可自动化完成从单细胞悬液到可用于测序的文库制备，手动操作时间从8小时以上缩短到1小时之内。自动化工作流程减少了手动移液带来的误差，可以产生一致且可重复的单细胞数据。

    作为10x Genomics官方签约一级代理商，斑马鱼公司具备丰富的单细胞测序和空间转录组实验方面经验，可为用户提供单细胞悬液制备，单细胞测序，建库，生信分析等一整套解决方案。在购买仪器后，将安排有资质的工程师进行现场安装和培训。培训内容包括样本制备、仪器操作、数据分析。在培训完成后，客户还将获得全方位支持，包括远程技术支持（Technical Support）、现场应用科学家（FAS）、现场服务工程师（FSE）和生物信息学应用（Applied Bioinformatics）团队，覆盖实验工作流程、试剂耗材、仪器和软件的各个方面。

关于10x Genomics公司

    总部位于美国，纳斯达克股票代码TXG，是单细胞测序、空间转录组和组织空间原位多组学检测市场的全.球领导品牌，产品已被世界各地的研究人员所采用，包括《自然》杂志2019年排名前100的所有全.球研究机构，以及2019年研发支出排名的全.球前20名制药公司。产品被 4100多篇研究论文引用。

关于斑马鱼（北京）科技有限公司

    斑马鱼公司是实验室整体解决方案的专家，作为10x Genomics、Olink Proteomics、 PerkinElmer、TA仪器（沃特世Waters）、Merck Millipore……等公司的代理商，为生命科学、医学、制药和农业等研究领域提供全.球先进的仪器设备和试剂。

同时，我们拥有专业的实验室和技术人员，提供单细胞悬液制备、单细胞测序、空间转录组、组织空间原位多组学分析、Olink多重细胞因子及蛋白标志物组学检测、外泌体提取及表征、分子互作检测、细胞影像平台、个性化生物信息分析等实验技术服务。

     核酸提取耗材/PCR管/PCR板系列/PCR单管本生（天津）健康科技有限公司供应：移液器吸嘴，ELISA试剂盒，动物血清，全系荧光定量PCR耗材，产品包括：PCR单管、八联管、96孔板、384孔板。

　　PCR耗材容量有0.1ml和0.2ml两种，颜色有透明和白色两种，型号有单管、8联管、12联管，适用普通PCR和qPCR反应

　　【产品特点】

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　　精度模具充分管壁超薄均匀及产品的均一性，并具备的热传导效应，使管内反应液以最快的速度达到目标温度，促进样品扩增

　　15.4mm矮管设计降低由冷凝液造成的污染，锥形管的凸边设计有效地密封性，预防交叉污染

　　材料和处理工艺制造，平盖光损极低，适用于荧光定量PCR

　　无热解析出物，无内毒素

　　适用于大多数自动化实验仪器

　　有方向孔，易于辨别方向

　　核酸提取耗材/PCR管/PCR板系列/PCR单管本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

摘要：

心脑血管疾病是近 30 年来全 球较高死亡因素，而血栓形成是心脑血管意外的关键病理过程。在血栓性疾病的病理机制研究和新药研发中，对实验模型的血流动态分析极为必要。新兴脊椎动物模型斑马鱼体外发育且早期胚胎透明，并在受精后 24 小时即建立全身血液循环，故成为研究心血管循环相关疾病的理想动物模型。目前，已有较多标记特定细胞类型的转基因荧光鱼被各实验室广泛使用，例如标记红细胞的 Tg (LCR:eGFP) 鱼系，Tg (gata1:eGFP) 鱼系等，使血流动态观测更为便捷。本文集中介绍了如何使用高内涵成像系统对斑马鱼活体胚胎进行血流动态分析，并以苯肼血栓疾病造模为例，为该方法在观测血栓性疾病的应用进行了展示。本方法具有操作简便、通量大、及活体动态观测等优势，可应用于抗血栓药物及相关药物的大规模高通量体内筛选。

研究背景

血栓事件发生率在全 球逐年增加。其中，动脉血栓形成是缺血性心脏病与中风的关键病理机制，而静脉血栓形成可导致静脉栓塞与肺栓塞，是癌症病患中的主要致死因素。抗血栓治 疗主要包括抗凝与抗血小板治 疗。前者代表性药物如肝素、华法林等，主要通过抑 制凝血级联反应中的凝血因子发挥作用；后者则主要作用于血小板活化信号通路中的关键靶点，如环氧化酶抑 制剂阿司匹林通过抑 制血栓素 A2 合成发挥抗栓作用，是心脑血管血栓性事件二级预防的一线用药 (Depta  and  Bhatt,  2015) 。然而，包括阿司匹林在内的抗栓药物仍存在较多临床局限性，如导致消化道出血等，临床使用仍存在争议 (Raber et al., 2019) 。因此，抗栓治 疗领域的新药研发仍是重要研究方向。在血栓性疾病的病理机制研究和新药研发中，对实验模型的血流动态分析极为必要。斑马鱼是新兴脊椎动物模式生物，因其繁殖力强，胚胎体型小且早期透明等独特优势，倍受发育生物学及大规模毒理学及药理学筛选相关研究的青睐。其中，斑马鱼胚胎在受精后 24 小时即建立全身血液循环，且其心血管系统相关信号通路与人类高度保守，故成为研究心血管循环相关疾病的理想动物模型。本课题组前期工作结合红细胞特异性荧光标记转基因荧光鱼，例如 Tg (LCR:eGFP) 鱼系 (Ganis et al., 2012) ，Tg (gata1:eGFP) 鱼系 (T raver et al., 2003) 等，使用苯肼构建血管内皮及红细胞膜损伤相关的血栓疾病模型，对活 血化瘀类中成药中的抗栓活性成分进行了筛选及深入分析 (Sheng et al., 2020；Li et al., 2021) 。实验工作中发现，使用手动式显微镜逐孔视频拍摄，及后期基于视频与其他图像处理软件的红细胞流速定量分析过程对时间与人力成本要求较高，难以适应大规模药理筛选的通量要求。而使用高内涵成像系统，可自动进行拍摄，并通过其配套软件完成血流定量分析，具有操作简便、通量大、及活体动态观测等优势，可应用于抗血栓药物及相关药物的大规模高通量体内筛选。因此本文以苯肼血栓疾病造模为例，介绍高内涵成像在斑马鱼活体胚胎进行血流动态分析相关实验方法，对该方法在观测血栓性疾病的应用进行了展示。

材料与试剂

1. Tg (LCR:eGFP) 转基因斑马鱼 (Ganis et al., 2012) （购自浙江大学公共技术平台斑马鱼分平台）

2. 苯肼（阿拉丁, catalog number: G1324044）

3. 阿司匹林（碧云天, catalog number: M0119A）

4. 1-苯基-2-硫脲 (PTU) (Sigma-Aldrich, catalog number: 103-85-5)

5. 亚甲基蓝（阿拉丁, catalog number: M19650）

6. 3-氨基苯甲酸乙酯（Sigma-Aldrich, catalog number: MS-222）

7. 二甲基亚砜（阿拉丁, catalog number: D103281）

8. 蛋白酶（Roche, catalog number: 165921）

9.  一次性实验室用塑料吸管（为尔康, catalog number: W208）

10. 96 孔黑板（Corning, catalog number: 3340）

11. E3 胚胎培养液（见溶液配方）

仪器设备

1. 高内涵成像系统（Molecular Devices, model: ImageXpress Micro Confocal）

2. 体式显微镜（麦克奥迪, model: SMZ-168）

3. 微量移液器（德国, model: Eppendorf）

4. 实验用斑马鱼养殖与繁育系统（上海海圣, model: Z-C-D5）

5. 智能生化培养箱（宁波赛福, model: SPX-250）

实验步骤

一、斑马鱼饲养及胚胎采集

成鱼饲养条件：28 °C 恒温饲养；光暗时间 14 h:10 h ；每日给予两次饲喂。具体养殖条件参照 (Westerfield, 2000)

胚胎采集：选择红细胞荧光标记的转基因鱼系，实验前一日 19:00 之前将雌雄鱼按 1:1 ，2:1 或 2:2 的比例放于交配盒中，用挡板隔开雌雄鱼。第二日 9:00 左右抽出挡板，雌雄鱼进行交配。待其产卵后，将受精卵收集至 10 cm 培养皿中，置于 E3 胚胎培养液中，于生化培养箱中 28.5 °C 孵育至受精后 24 小时。

抑 制黑色素生成：胚胎发育至约受精后 24 小时，换液至含有 200 μM PTU 的 E3 胚胎培养液，以抑 制黑色素的生成便于后续显微成像。继续孵育至血流动态观察时期，或相应药物处理时期。

二、斑马鱼胚胎入板及药物处理

胚胎入板：胚胎发育至受精后 24 小时即建立血流，可根据具体实验需求选择合适时期进行血流动态观察。荧光成像前，在体式显微镜下使用一次性实验室用塑料吸管或 1 ml 移液器，将其按每孔一枚胚胎的比例移入 96 孔板，每孔放置 300 μl E3 培养液或添加药物的培养液，并进行后续实验操作。

早期胚胎破膜：斑马鱼胚胎外层绒毛膜约在受精后 30-48 小时自行破裂，胚胎自然脱壳。但如需观测早期血流，则需要进行人工破膜。将胚胎孵育于添加 2 mg/ml 蛋白酶的 E3 培养液约 10 分钟后，使用 E3 培养液润洗 3-4 次，使胚胎与绒毛膜分离。

药物处理：如需药物处理构建疾病模型或进行药理学分析，待胚胎发育至相应阶段， 进行药物处理。以苯肼造模及阳性抗凝药阿司匹林为例 (Sheng et al., 2020)：

• 阿司匹林预保护：待胚胎发育至受精后 2 天，将胚胎按每孔一条的比例移入 96 孔板，加入 300 μl 含 15 μg/ml 阿司匹林的 E3 培养液，孵育 24 小时。

• 苯肼血栓造模：待胚胎发育至受精后 3 天，加入 300 μl 含 0.75 μM 苯肼的 E3 培养液，造模 12 小时后，替换为 300 μl E3 培养液，进行后续拍照分析。

三、斑马鱼胚胎血流拍摄

胚胎麻醉：在 E3 培养液中添加 0.016% 3- 氨基苯甲酸乙酯后，等待约 10 分钟。体式显微镜下用移液枪头轻触胚胎，如无明显逃避反应，提示麻醉成功，此时胚胎大多呈现侧躺状态。

拍摄血流动态视频：使用高内涵成像系统进行逐孔自动拍摄（图 1-2 ）。首先在 2 倍镜或 4 倍镜下定位胚胎并进行初步手动对焦，也可使用高内涵成像平台自带软件 MetaXpress 编程进行自动对焦。选中血管区域，切换 20 倍镜拍摄视频，拍摄速度为 35.7 帧/秒 （详见视频 1 ）。

四、斑马鱼胚胎红细胞流速定量分析

自动定量红细胞流速：拍摄后，选取每个斑马鱼胚胎相同部位的背主动脉和尾静脉位点进行观察，使用 MetaXpress 软件自动测算该位点在单位时间内流过的红细胞数目（图 3-4 ）：MeasureàRegion  MeasurementsàSelect RegionàMeasure Integrated Intensity  。

血流流速分类：首先计算出对照组血流速度的平均值△，将 ≥70%△ 定义为“血流正常”，反之则定义为“外周血流受阻”。该比值可因具体实验中观测到的阳性药药效或目标筛查敏感度而定 (Sheng et al., 2020) 。

样本重复及统计分析：建议各组设置 8-12 枚胚胎，并计算出一个血流正常比例数值，作为单个生物样本重复。各组都进行至少 3 次生物样本重复。两组间采用Student’s t-test 分析进行比较，多组间采用 one-way anova 分析比较，P<0.05 认为有统计学意义。

结果与分析

在低倍镜下定位胚胎

图 1. 空白对照组 Tg (LCR:eGFP) 转基因斑马鱼胚胎

图 2. 苯肼血栓造模组 Tg (LCR:eGFP) 转基因斑马鱼胚胎

对高倍镜下拍摄视频中血流速度的自动分析

图 3. 空白对照组 Tg (LCR:eGFP) 转基因斑马鱼胚胎血流流速定量分析

图 4. 苯肼血栓造模组 Tg (LCR:eGFP) 转基因斑马鱼胚胎血流流速定量分析

溶液配方

E3 胚胎培养液

0.29 g/L NaCl, 0.013 g/L KCl, 0.048 g/L CaCl2 •2H2O, 0.082 g/L MgCl2 •6H2O, pH 7.2，使用去离子水配制。

致谢

感谢浙江大学药物信息学研究所 -Molecular Devices 高内涵成像联合实验室的设备支持。该项目受国家自然科学基金（项目编号 81822047 ）的支持资助。