分离mRNA过程中，如果RNA有DNA污染会有影响吗

我家喻文州 2012-11-29 09:26:57 1101 浏览

参与评论

登录后参与评论

全部评论(4条)

四个人高兴撸管 2012-12-02 00:00:00

如果RNA中有DNA污染一定会对实验有一定的影响的。 1. 如果你扩增的基因有内含子，那么跨内含子设计引物可能不会有非特异扩增。但是如果DNA残留多的话会对PCR酶产生影响，扩增效率有收到YZ。 2. 如果你的基因没有内含子，那么有DNA扩增就会增强扩增信号（Real-Time信号会虚高，普通RT-PCR条带会比实际的亮），干扰到Z终的分析结果。 3. 如果你的基因本身有内含子，而你没有特别设计引物，DNA残留稍微多一点那么你有可能会在Real-Time结果分析中看到溶解曲线有杂峰，或者在RT-PCR中出现非特异带。建议你使用DNaseI处理步骤的试剂盒提取RNA，比如RNAprep系列（TIANGEN）的试剂盒或者使用TIANGEN的去基因组RT试剂盒FastQuant RT Kit(With gDNase），去基因组和RT总共只需要十几分钟。即使有非常严重的DNA污染都能去除的很干净，不会影响实验，而且价格和普通的RT试剂盒几乎一样很划算也很方便，你可以试试。

赞(12)

回复(0)

评论

评论
登录后参与评论
vg枯产喏 2012-11-30 00:00:00

这要看你的实验要求。一般都会去除DNA污染。我们都是用promega的RQ1（无RNase 活性的DNA 酶）处理。

赞(21)

回复(0)

评论

评论
登录后参与评论
天天听音乐go 2012-11-30 00:00:00

有的。你提取的RNA有DNA污染，那么反转录以后的cDNA也就有基因组DNA污染，这样，你扩增cDNA或者做qPCR，都会出现杂带或非特异性扩增，对实验结果不好。所以一般吸取RNA上清液的时候，宁可浪费点RNA也不要混杂有下层的DNA。

赞(16)

回复(0)

评论

评论
登录后参与评论
George926798 2018-06-26 00:00:00

有的. 你提取的RNA有DNA污染，那么反转录以后的cDNA也就有基因组DNA污染，这样，你扩增cDNA或者做qPCR，都会出现杂带或非特异性扩增，对实验结果不好. 所以一般吸取RNA上清液的时候，宁可浪费点RNA也不要混杂有下层的DNA.

赞(4)

回复(0)

评论

评论
登录后参与评论