sds-page电泳技术分离蛋白质是根据蛋白质什么性质不同

无畏曦 2017-12-16 09:31:59 919 浏览

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巨蟹king87 2017-12-16 20:13:55

你的胶是考染的吗? 首先你得先知道一点蛋白质的基本理论知识(不会不知道吧?难道你是学医的?)，或者说蛋白质(包括其他分子，如DNA、RNA等)电泳的原理(或者说是分离原理)。只说蛋白质:蛋白质在正常情况下，一般带有负电荷，因由不同的蛋白分子因为性质(空间结构以及基团性质)不同而带电量不同，这样结合蛋白质分子本身的不同质量，会在电场下(即电泳中)产生不同的移动速度，进而将不同的蛋白分离开。又为了消除蛋白质分子间性质的差别，创造一个单一因素的电泳分离条件，所以在进行蛋白质电泳之前，都会对蛋白质进行变性处理(非变性胶等不在此列)，使蛋白质肽链打开:SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。如此，蛋白质(准确的说应该是变形后的蛋白质或者是蛋白- SDS胶束)便会在电场中根据不同的带电量- 亦即分子量而分成不同的条带。每一条带代表着不同分子量大小的蛋白质组合(一组蛋白质)。上面只说的是SDS-PAGE胶蛋白质电泳。当然，在电泳后，需要进行染色，你才能看到蛋白条带(Marker除外，因为它是带有耦合染料的蛋白质分子或片段)。

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