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- 风雨魔猫 2017-11-24 00:00:00
- 经典液相(柱)色谱法使用粗粒多孔固定相,装填在大口径、长玻璃柱管内,流动相仅靠重力流经色谱柱,溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢,柱入口压力低,仅有低柱效,分析时间冗长。 GX液相色谱法使用了全多孔微粒固定相,装填在小口径、短不锈钢柱内,流动相通过高压输液泵进入高柱压的色谱柱,溶质在固定相的传质,扩散速度大大加快,从而在短的分析时间内获得高柱效和高分离能力。
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- (GX)液相色谱法的介绍
血药浓度检测的方法之一是色谱法,也就是色层法、层析法。这里介绍一下液相色谱法。
液相色谱(liquid chromatography,LC)是一种色谱技术,常用于医学领域,研发更科学的YF。作用是可以分析溶液中的各种物质及其含量,观察其相互的反应和状况,以得到结果。而GX液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是使用高色谱分辨率进行GX分离的高性能分析。液相色谱法目前已广泛用于环境,农业,医药等领域。
以GX液相色谱法为例,这种方法适用范围很广,由于不受分析对象挥发性和稳定性的限制,适用度达80%,而气相色谱法约只占20%。
GX液相色谱法(HPLC)是现代分离测试的重要手段。是在经典的液相色谱法基础上发展起来的,其分离机制与常规柱色谱相同,但填料更加精细,柱效高,分析速度快。实现了对样品的GX分离测定,吸取了经典液相色谱的研制经验,引入了微处理机技术,提高了仪器的自动化水平和分析精度。现在的GX液相色谱仪自动化程度很高,为色谱分析工作者提供了GX率、功能齐全的分析工具。
GX液相色谱法的应用范围广泛,适用的样品范围广,具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定生理活性物质的特点,弥补了气相色谱法的不足。
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01、流动相
GC用气体作流动相,又叫载气。常用的载气有氦气、氮气和氢气。与HPLC相比,GC流动相的种类少,可选择范围小,载气的主要作用是将样品带入GC系统进行分离,其本身对分离结果的影响很有限。
而在HPLC中,流动相种类多,且对分离结果的贡献很大。换一个角度看,GC的操作参数优化相对HPLC要简单一些。此外,GC载气的成本要低于HPLC流动相的成本。
02、固定相
因为GC的载气种类相对少,故其分离选择性主要通过不同的固定相来改变,尤其在填充柱GC中,固定相常由载体和涂敷在其表面的固定液组成,这对分离有决定性的影响,所以,导致了种类繁多的GC固定相的开发研究。迄今已有数百种GC固定相可供我们选择使用,但常用的HPLC固定相也就十几种。
故LC在很大程度上要靠选用不同的流动相来改变分离选择性。当然,毛细管GC常用的固定相也不过十几种。在实际分析中,GC一般是选用一种载气,然后通过改变色谱柱(即固定相)以及操作参数(柱温和载气流速等)来优化分离,而LC则往往是选定色谱柱后,通过改变流动相的种类和组成以及操作参数(柱温和流动相流速等)来优化分离。
03、分析对象
GC所能直接分离的样品是可挥发、且热稳定的,沸点一般不超过500℃。据有关资料统计,在目前已知的化合物中,有20%~25%可用GC直接分析,其余原则上均可用LC分析。也就是说GC的分析对象远没有LC多。
需要指出的是,有些虽然不能用GC直接分析的样品,通过特殊的进样技术,如顶空进样和裂解进样,也可用GC间接分析。比如高分子材料的裂解色谱就是如此。这在一定程度上扩大了GC分析对象的范围。此外,GC比LC更适合于气体的分析。
04、检测技术
GC常用的检测技术有多种,比如热导检测器(TCD)、火焰离子化检测器(FID)、电子俘获检测器(ECD)、氮磷检测器(NPD)等,其中FID对大部分有机化合物均有响应,且灵敏度相当高,zui小检测限可达纳克级。
而在LC中尚无通用性这么好的高灵敏度检测器。商品LC仪器常配的也就是紫外-可见光吸收检测器(UV-Vis)和示差折光检测器(RI)。前者的通用性远不及GC中的FID,后者的灵敏度又较低,且不适于梯度洗脱。当然,不论GC还是LC,都有一些高灵敏度的选择性检测器,GC有ECD和NPD等,LC有荧光和电化学检测器。较为理想的检测器应该首推MS,但在这一点上,GC目前要优于LC。
因为GC流动相的特点,它与MS的在线联用已不存在任何问题,特别是毛细管GC与MS的联用已成为常规分析方法。而LC与MS的联用就受到了流动相的限制。虽然目前已有多种接口,如离子束、热喷雾、电喷雾等,但流动相的选择还是受到明显的限制。
总体来说,气相具有良好的分离能力 高灵敏度 快速分析速度 易于操作等。由于技术条件的限制,难以通过气相色谱分析沸点太高的物质或热稳定性差的物质。通常,衍生化方法或裂解方法可用于挥发性较低或易于在500℃或更低温度下通过加热分解的部分。
而GX液相色谱只需要将样品制成不需要气化的溶液,因此不受样品挥发性的限制。对于高沸点 热稳定性差 相对较大的分子量(超过400或更多)的有机物质(一些物质占总有机物质的近75%至80%)。原则上,GX液相色谱可用于分离 分析。据统计,在已知化合物中可以通过气相色谱分析约20%,并且可以通过液相色谱分析约70-80%。
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