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从1985年至今的30多年时间里，PCR分析经历了三代技术的发展。DY代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，ZH用Cq值对基因进行定量分析。第三代数字PCR技术，通过将PCR反应液进行有限稀释，实现核酸分子的单分子扩增，ZZ采取终点法检测阳性微滴的荧光信号，有荧光信号的微滴判读为 1；没有荧光信号的微滴判读为 0，因此该技术被称为数字PCR。

PCR技术在不断地蜕变却从未淡出我们的视野，如今已经渗透到分子生物学领域的各种研究层面。尤其在今年大流行疾病中，展现了PCR技术的强大之处。那在科学研究中，我们该如何选择传统PCR 、荧光定量 PCR与数字 PCR呢？

首先我们要清楚，三代PCR技术所有的基础源于PCR反应的基本原理和PCR反应的3个重要阶段，分别是指数期、线性期和平台期。

指数期

指数期内，每个循环PCR产物量大约增加1倍（假定 100%反应效率），该阶段的扩增反应具有高度特异性和精确度。

线性期（高变异性）

随着PCR反应体系成分的消耗，其中的一个或者多种成分限制反应，导致反应开始减缓，并且每个循环的PCR 产物不再加倍。

平台期

反应停止，不再产生更多的产物。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每个反应将在不同的时间点进入平台期，平台期内可以看到这些差异。

传统 PCR

传统PCR通过琼脂糖凝胶电泳对PCR终产物进行分析（图2），它的局限性就在于只能做定性分析。在图3中，3个反应孔含有相同量的 DNA模板，但到达平台期后产生的荧光信号却不同，说明扩增产物的量存在不同（反应动力学变化所致）。这也表明了传统PCR平台期测量时结果存在变异，产出的DNA量不一定能反映最初情况，所以无法进行定量。

荧光定量 PCR

同样在图3中，发现在指数期内，3个反应孔的扩增曲线完全重合，说明指数期内进行检测将更加精确，可实现更加准确的定量。阈值线是扩增产物荧光强度超过背景时的一个荧光强度值，样品达到此荧光强度值所经过的循环数称为Cq值。通过比较未知浓度的样品与一系列标准品的Cq值，可以精确测定未知反应中的模板 DNA数量。

数字 PCR

数字 PCR 是通过将样本DNA随机分布至独立的反应单元中，每个反应单元中包含或者不包含1个或多个拷贝的目标分子，所有独立的反应单元进行平行扩增后，对每个反应单元的阴性或者阳性荧光信号进行检测并进行统计学分析，就可以计算出原始样本的拷贝数，无需参考标准品或内源性对照品，也不需要标准曲线。

传统PCR 、荧光定量 PCR与数字 PCR的选择

深蓝云生物科技为您提供美国Azure Cielo 3/6通道荧光定量PCR系统和

        法国Stilla Naica全自动3色/6色微滴芯片数字PCR系统。

Azure  Cielo™实时荧光定量PCR系统

来自于美国Azure Biosystems公司，为您提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道，可根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；ZY的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和干扰。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高JZ度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。

Naica™微滴芯片式数字PCR系统

法国Stilla Technologies Naica数字PCR平台是实现高灵敏DNA/RNAJD定量的技术工具，只需一步移液操作，即可自动生成单层平铺的微滴，同一反应液进行多基因的单分子模板扩增，通过三色或六色荧光通道检测，自动QC质控，识别多色荧光中有效的阴阳性微滴，从而达到目的DNA/RNA的高JZjuedui定量。同时提供原始数据、单微滴追溯等功能，确保数据真实可靠。

参考文献：

1. Sykes PJ, Neoh SH, Brisco MJ, Hughes E, Condon J, Morley AA. Quantitation of targets for PCR by use of limiting dilution. Biotechniques. 1992;13(3):444-449.

2. Vogelstein B , Kinzler K W . Digital PCR[J]. Proceedings of the National Academy of ences of the United States of America, 1999, 96(16):9236-9241.

3. Heyries KA, Tropini C, Vaninsberghe M, et al. Megapixel digital PCR. Nat Methods. 2011;8(8):649-651.

4. Dingle TC, Sedlak RH, Cook L, Jerome KR. Tolerance of droplet-digital PCR vs real-time quantitative PCR to inhibitory substances. Clin Chem. 2013;59(11):1670-1672.

5. Whale AS, Huggett JF, Cowen S, et al. Comparison of microfluidic digital PCR and conventional quantitative PCR for measuring copy number variation. Nucleic Acids Res. 2012;40(11):e82.

随着国内疫情状况逐步缓解，国民生产活动的大环境得到了很好的改善。近日，欧美克仪器在继续为新老用户提供线上服务的同时，也逐步恢复了各类线下和大家交流沟通的渠道，近期我也回访了相关区域的部分老用户，其中在与一位非金属矿行业的客户朋友崔总交流时，对方的一句让我印象深刻：“我喜欢欧美克，虽然贵了点!”

崔总在全国有多家工厂，因此对激光粒度仪的需求较大，也接触了不少粒度仪厂商。其中不乏产品介绍符合生产需求，售价比欧美克低很多的仪器推荐，但崔总却仍然选择了成交价较高的欧美克品牌仪器。作为一名在欧美克仪器工作了多年的员工，虽然已经不是DY次听到客户发出这样的感叹，但崔总的这句话还是让我的自豪感油然而生，这句话也代表了崔总及广大的欧美克老客户群体对欧美克这个品牌的认可。

与欧美克老客户崔总的聊天记录

对于客户做出这样的选择，作为奋战在一线的销售员工，我想可能原因主要是以下三个方面：

一、 远超国内同行的产品性能

自2010年珠海欧美克仪器公司加入英国思百吉集团后，欧美克也成为马尔文帕纳科的旗下品牌，依靠马尔文帕纳科强大的研发管理经验，引进先进的生产品控管理体制，在国际过硬的技术加持下，欧美克仪器经历了产品更新换代、体制改革焕新，迈进了公司发展的新篇章。

在非矿行业上，欧美克仪器深耕20余年，赢得了优质的客户口碑，靠的就是领先国内同行的仪器产品性能。广西地区的非矿主要以碳酸钙为主，行业老板们自称“钙帮”，一来“钙”和“丐”同音，二来是碳酸钙行业以往高利润的日子已一去不复返，现在都是微利的时代。对于生产重钙粉的企业来说，电费是生产主要成本之一，钙粉目数的大小与粉碎时间与耗电是成正比的，严格地把控钙粉的粒度情况，是节能降耗的主要手段之一。欧美克仪器能在广西地区占有率高达70%以上，靠的就是仪器优越分辨能力。

用欧美克基础款的LS-POP(9)型号仪器（该产品是基于马尔文帕纳科先进的技术底蕴生产的，也是在非金属矿行业用户使用最多的型号）与某国产品牌粒度仪厂商生产的同档次型号的仪器A和其高端仪器B进行分辨能力的对比测试，测试的样品分别是碳化硅（SiC） 60#、500#、3000# 混合样，如图所示，欧美克LS-POP(9)可准确而清晰的分辨此三种不同规格碳化硅混合样品，但某品牌的A和B两款型号的仪器均不能准确分辨混合样品中的不同峰型。

欧美克LS-POP(9)“三峰”混合样测试结果，准确分辨三个峰。

某国产品牌A型号“三峰”混合样测试结果，只能分辨两个峰。

某国产品牌高端B型号“三峰”混合样测试结果，10次测试只有1次能分辨三个峰

对于激光粒度仪来说，优越的分辨能力，除了能助客户准确把握粉碎时间，节能降耗外，更重要的是为客户把好产品质量的严关，避免因质量问题，导致产品被退货，甚至出现丢失客源的危险。欧美克仪器的优越性能，除了在重钙超细粉上得到体验，更能在立磨岗石粉的检测上诠释。

近几年，贺州地区的人造岗石厂如雨后春笋般地建成投产，而人造岗石所使用的重钙粉，基本上是采用立式磨粉机设备生产的，立磨岗石粉具有粒径分布宽的特点。相对环辊磨超细粉这种分布较为集中的重钙粉，立磨岗石粉能否测好，对于激光粒度仪的性能是具有较大的考验。

岗石粉一般需要ZD关注2μm含量、D50、D97和Dmax等参数，欧美克目前的激光粒度仪产品，不管是基础型的LS-POP(9)，还是智能型的LS-609，以及高性价比型的LS-909，均能满足对立磨岗石粉的测试要求。仪器测试的真实性和测试结果的稳定性为客户的岗石粉生产质量控制提供强而有力的保障！

某客户的立磨岗石粉粒度分布图

某人造岗石厂客户仪器使用现场（LS-909）

目前欧美克的仪器产品的主机均具有全密封的防尘效果，加上主机内部激光器的空间滤波器装配方式采用强永磁体固定，针孔在受到外力干扰下，不容易产生偏移，大大提升了光路的稳定性，使我司的仪器更易维护和操作。光源采用He-Ne气体激光发射器，相比于其他的激光发射器具有单色性好、相干性高、发散角小、稳定性强等优点，同时采用一体化激光发射器ZL设计（ZL号：00228952.0），有效降低了激光管热变形、外界机械振动对仪器稳定性的影响。搭配的是全自动循环进样系统，采用自吸泵进水，具有自动进水、自动排空、自动排气泡及自动清洗功能，内置底部超声功能，可实现“一键”完成测试。

二、 及时优质的售后服务

不夸张的说，欧美克仪器的售后服务一直以来都可以算得上是激光粒度仪品牌中做得最体贴入微的，这点欧美克的广大老用户群体相信深有体会，尤其是广西地区的这帮“钙帮”的老板们。

广西的碳酸钙企业，一般的布局有两种情况，一是像贺州地区般的集中，二是如河池、百色地区般的星罗棋布在群山中。不管是交通便利的贺州地区，还是山路崎岖的河池、百色，欧美克的售后工程师们，必应客户之所急，及时赶到客户现场，为客户解决问题。

像贺州的粉厂客户，不管是雷蒙的粗粉、环辊磨超细粉，还是立磨岗石粉，一般只需一台欧美克的激光粒度仪即可满足检测要求。如遇到仪器故障，欧美克仪器给客户在服务时间上的承诺是：工作时间，2小时内响应客户服务需求，不超过3个工作日内到达服务现场；节假日，4小时内响应客户服务需求，不超过5个工作日内到达服务现场。而有些使用其他品牌粒度仪的粉厂往往需要准备2-3台激光粒度仪以保障生产的流畅性。

欧美克仪器总部设在广东珠海，对于广西地区具有得天独厚的服务辐射优势，服务的及时、到位，是客户选择欧美克仪器的理由之一。但及时的上门维修服务，并不是欧美克优质服务的全部，针对客户新增样品的测试，欧美克还有一个专业的测试应用团队，为客户提供科学、专业的测试方法开发、粒度控制方案等服务。另外，欧美克还不定时组织区域客户的免费回访，了解客户的测试需求及产品发展情况，并提供免费的使用培训和仪器维护服务，如今年5月，在疫情期间，为了协助客户复工复产而进行了的贺州地区非矿客户回访活动等等。

售后工程师免费上门给客户维护老仪器

三、 JD诚信的行为宗旨

一个人的价值观、世界观决定了其平时的言谈举止及行为准则，一家企业亦是。自加入成为英国思百吉公共公司的成员后，“赢之有道”成为了欧美克仪器的核心价值观。欧美克的诚信（“be ture”）、尽责（“own it”）和ZY（“aim high”）体现在我们的产品、服务以及各种商务活动等每一个方面和细节里。

“质量就是生命”，欧美克仪器旨在建立全员参加、全过程、全方位的质量管理体系。从市场调研，产品设计，材料采购到生产，销售，运输，安装和维护等各个环节把好质量关，把“DY次就把事情做正确”的意识嵌入每一个环节，去积极预防问题，把问题扼杀在摇篮里，在每一个欧美克人心中建立一个“零缺陷”的标准，将问题的预警和解决机制渗入欧美克仪器的每一个岗位，共同实现更全面和完善的产品质量把控。由单纯的符合标准转变为了解客户、满足客户需求，使得欧美克仪器能够面向市场长期提供客户需要的产品和服务。

欧美克仪器坚持做您值得信赖的粒度检测与控制技术专家！以优质的产品质量和售后服务，赢得每一位新老客户的支持和青睐！

像崔总这样的欧美克的忠实老用户其实还有很多，每当我们业务人员坚持原则讲解知识推荐产品而被一些希望投机取巧的人质疑和嘲笑时，正是像崔总这样的一个个认可欧美克理念，不断求实进取的企业家或技术人员的简单质朴的认可，支撑着我们每一个欧美克业务人员坚持原则，砥砺前行，也支撑着欧美克仪器继续脚踏实地，做循名责实的良心粒度仪厂商。