密度梯度离心法提取的叶绿体是否纯净

萌丹00 2009-12-27 16:53:09 930 浏览

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杨玉莹1990 2009-12-28 00:00:00

我觉得不是纯净的

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zg12345678930 2009-12-31 00:00:00

分离方法有差速离心法和密度梯度离心法。密度梯度离心法的纯净与否与分辨率有很大关系吧，高分辨率分离出来的条带还是比较一致的。想想当年CsCl梯度都能把含有重金属元素大分子和普同大分子分离，足够高分辨率

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wanghedong44 2016-12-02 03:47:45

用钻空子的思想来说的话，，，肯定不纯，，，细胞破碎时，，细胞中的某些组分很可能变成和叶绿体一样的大小，平衡密度梯度离心法。用超离心机对小分子物质溶液，长时间加一个离心力场达到沉降平衡，在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。若在该溶液里加入少量大分子溶液，则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降，比溶剂密度小的部分就会上浮，Z后在重力和浮力平衡的位置，集聚形成大分子带状物原理嘛，通俗来就说就是按重量来分的. 正常人思维，以上因素是不考虑的，，，，因为，细胞中的某些组分很可能变成和叶绿体一样的大小，的概率只有天才知道，，，只要知道原理就好理解，，再有就是吸取时，可能有误差，，过程如下 1、将收集的组织或脏器或其他，用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液，经反复冻融3 次后，置- 20 ℃冰箱中，备用。 2、先以5000g离心15分钟后，获取上清夜，然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜。 3、接着10万g超速离心2h，将沉淀用少量STE溶解。 4、先在超速离心管中加入5-8mL的第3步所获取的含病毒样品的溶解液，然后在离心管中依次加入30 % ， 45 % ， 60 %的蔗糖，加的时候是用长针头从底部往上加的。11万g离心2.5h，发现在30 %与45 % 以及45 % 与60 %之间都有一条明亮的带，用长针头将两条不同部位的带都吸取出来，分别收集到不同的瓶内。 5、去蔗糖；用STE缓冲液适量稀释纯化的病毒，然后11万g离心3h，用少量STE（根据沉淀的量决定加入多少）缓冲液把沉淀悬起，即Z后获得了纯化的病毒。-20度冻纯备用，用时可用分光光度计测定其病毒含量。

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