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本文转自http://www.easylabplus.com/index-news-describe-html-749.html

  鬼峰是液相色谱中Z常出现的问题之一，鬼峰来源多种多样，理论上讲，在HPLC系统中任何一个节点均有可能引入鬼峰，依据鬼峰出现的频率，其主要来源于溶剂问题，仪器问题、流动相残留气泡以及操作不当等。主要分为以下几种情况 ：

1.溶剂问题 

a有机溶剂 

  甲醇制备工艺相对乙腈来说较为简单，杂质含量也较少。但是由于甲醇紫外吸收范围比乙腈广，所以当使用紫外检测器时，尤其是波长较低时，尽量使用乙腈作为有机相，用甲醇的话漂移太大。而用作梯度色谱的乙腈质量要求较高，一般用进口梯度色谱专用乙腈能够很好的减少鬼峰的出现。 另外如果有机相使用完后未更换新的流动相瓶，而是采用直接添加补充的方式也有可能会产出鬼峰。

b水 

  很多单位用自制蒸馏水作为水相，但是结果并不是很好。原因就是一些低沸点的有机杂质并不能够通过蒸馏除掉。有条件的尽量用HPLC级的纯水，没有条件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水代替，但是如果色谱条件比较严格也是有可能出问题的。 此外，水相要现配现用，避免微生物滋长。

c其它试剂 

  缓冲盐、TFA、EDTA等试剂也会对流动相造成很大的影响，尽量用纯度高的试剂配制流动相。

2.仪器问题

a液相的流动相管路被污染 

  长时间的使用含水量较高的流动相（尤其是加入缓冲盐的），细菌就容易在管路中滋生，细菌的代谢产物或是细胞碎片能造成鬼峰。

b检测器样品残留 

  多为一些样品组分在检测器流通池内的残留，其特点具有先后针之间的重复性差，或者没有重复性，色谱峰峰形特别尖锐类似大的毛刺。该种情形下，需要对流通池特别是石英视窗进行彻底清洗(联系工程师或者严格按照manual进行)

c单向阀堵塞 

  造成系统压力不稳，从而产生鬼峰。早期岛津的液相单向阀貌似不能用纯乙腈作为流动相，现在应该已经得到改进。  

d色谱柱中组分残留 

  色谱柱可对流动相或系统流路内的强保留污染组分起到富集作用，在有机相比例随梯度程序变化的过程中而被冲洗出来。在使用较长的色谱柱的时候尤其值得关注，因此，在水相不确定是否有杂质存在的条件下，梯度运行后的再平衡时间尽可能的短，一般以10倍柱体积为宜。

3.流动相残留气泡

  保留时间一般不可重现，即使流路中气泡连续存在，鬼峰出现的位置亦不可预测。可将流动相超声或鼓He脱除气泡并打开purge阀，大流速冲出仪器管路中的气泡，来减少气泡引起的鬼峰现象。

a在线脱气机脱气不完全 

 a在线脱气机脱气不完全。

b两种流动相的有机相比例相差太大 

  例如A为水，B为乙腈。在梯度条件允许的情况下尽量减少两中流动相之间的差距，降低空气在两中流动相中溶解度的差异，从而减少气泡的产生。 

c流动相配置好后预先超声脱气 

  c流动相配置好后预先超声脱气。

4.操作问题 

a流动相配置过程中受到污染 

  盛放流动相的容器或是样品瓶受到污染：这种污染可能来自于洗涤剂、铬酸洗液或是其他实验人员用完后的残留杂质。流动相容器的清洗一般用干净的水+有机溶剂涮洗就行，过多的清洗步骤反而可能造成二次污染。有时流动相容器的塑料盖碎片都有可能是杂质的来源。对于样品瓶污染情况下的鬼峰，容易排除，仅需要分别将样品溶解或稀释用的试剂以及进样小瓶更换，即可确定鬼峰的来源。

pH计：很多pH计以聚碳酸酯作为外壳，然而聚碳酸酯是可以溶于有机溶剂的，所以尽量使用玻璃pH计来测量流动相的pH。

滤膜：劣质的或者型号错误的滤膜往往是鬼峰出现的原因。

放置时间过长：流动相在空气中暴露时间过长，就可能吸收空气中的有机杂质，有时流动相中的添加剂，例如TFA，时间长了会氧化从而产生杂质。

  由自动进样器引入的鬼峰：自动进样器在进样之后，部分样品溶液残留在进样针头以及针座之上，对下次进样别的样品的结果产生干扰，出现鬼峰。对于一些强吸附性组分，尽管进行程序洗针，有时依然可能会引入鬼峰。针对这种情形，可在仪器平衡之后，分别进样不同试剂的Blank以及不进样，比较得到的图谱，基本可确定鬼峰是否来源于进样过程。

b样品稀释液与流动相极性或者pH相差太大 

  这也是导致鬼峰的原因之一，这种问题很有可能导致样品分为两个不同的阶段出峰，从而产生双峰或者多峰。

鬼峰对于反相液相色谱来说，是经常遇到的问题，对分析方法造成干扰并影响分析结果的准确性。从上面的讨论可以看出，尽管鬼峰的来源多种多样，基本应对原则就是，找到鬼峰的来源，更换流动相或更换添加剂或对仪器被污染部分进行清洗，在实验中避免不正确的操作。

按分离机制的不同，GX液相色谱法可以分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。

这些方法在使用的过程中往往会遇到诸如鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题，该如何解决这些问题呢？

01

用HPLC进行分析时，保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?

• 关于漂移问题

1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定

2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等

3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡

• 关于快速变化问题

1、流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定

2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出

3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合

02

液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?

1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子

2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子

3、可能柱超载，减少进样量

03

HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

1、样品量不足，解决办法为增加样品量

2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器

4、检测器衰减太多。调整衰减即可

5、检测器时间常数太大，解决办法为降低时间参数

6、检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗

7、检测池中有气泡。解决办法为排气

8、记录仪测压范围不当。调整电压范围即可

9、流动相流量不合适。调整流速即可

10、检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线

04

做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?如何解决?

1、泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理

2、比例阀失效，更换比例阀即可

3、泵密封垫损坏，更换密封垫即可

4、溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法

5、系统检漏，找出漏点，密封即可

6、梯度洗脱，这时压力波动是正常的

05

我Z近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么?

这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。

尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ods填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。

因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ods柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺(tea)，将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。

如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求，就不必保留时间的重现。

06

我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么?

柱压过高是HPLC柱用户Z常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，可按下面步骤检查问题的起因：

1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查

2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查

3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子。此时，不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池。这时，如果柱压仍不下降，再检查。只适用于使用过的柱子

4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系

一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。

07

色谱双峰产生的可能及判断和处理?

HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下(不包括梯度)，峰型应对称而尖锐。

但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理的情况下，会出现各种意想不到的问题，而难以对色谱峰作出合理的解释，对于新手来说更是如此。

色谱双峰指的是一种物质，在色谱图中出现双峰，表明含二种物质。这种情况分为四种原因：

• 色谱柱

如果你分析样品时发现每个色谱峰都出现双峰(出峰越快，双峰的可能性会减少)，尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出了问题——柱头受损或柱头固定相变脏或流失。

如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵。将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。

当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这时可以将进样头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。

• 溶剂极性及进样量

许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。

目前，HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。Z佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。

当用溶剂极性强度大的试剂，如，纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如，定量管为20μL，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比diyi峰小(每次都不太一样)，且拖尾，保留时间会提前(相对进样量少而言)，将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。

这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。

上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但量很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾(如果出峰很快，也可能是色谱柱问题)。将样品稀释再进样就可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。

• 样品的特性

有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。

在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其pH，双峰现象将消失，如，红霉素等。

有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在LC-MS下，用质谱检测器，其质谱的总离子流图上较明显。

• 参数

记录的参数一般都内定的，不必修改，但GC和HPLC的参数是不完全一致的。

例如，c-r3a数据记录仪上的一般记录时间间隔GC为2MS，HPLC为5MS，如果记录间隔时间缩短，一个峰将变为二个峰或更多。

08

色谱柱中的流动相会排干吗?

不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。

如此情况是否会损坏色谱柱?泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了?色谱柱还能使用吗?

事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。

相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。

同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。

可以尝SY一种完全脱气的、表面张力低的溶剂(如经氦气脱气的甲醇)冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面;已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要(以1mL/min的流速)冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。

09

使用peek管路和接头需要注意什么问题?

如果经常需要改变流路或更换不同品牌的色谱柱，使用peek材料制成的管路和接头会非常方便。peek管路容易连接;peek接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且容易调节锥箍之外的管路长度，方便与不同品牌或规格的色谱柱相连接。

使用此类材料的管路需要注意的是：peek对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。虽然未观察到上述溶剂溶解peek材料的明显迹象，但，peek遇到上述溶剂会变脆。另一个西药考虑的因素是压力限。不锈钢管可耐受6000psi的压力，但peek管只能耐受近4000psi(但多数hplc应用系统压力不会超过3000psi)。

使用peek接头时则无需担心接头耐溶剂性能，因为接头几乎或很少与溶剂直接接触。但手拧固定的peek接头压力限低于不锈钢管，因而压力太高时，可能会使接头在管路上滑动而产生死体积或漏液。

10

液相色谱梯度洗脱中柱温的影响

• 等度保留

大多数色谱工作者知道等度洗脱时温度会影响保留时间。拥有温控系统的实验室一般都有全天候温控设置，但这种设置可能引起室温显著变化，这对整夜运行的色谱系统就会有一些影响。

例如，我们实验室的夜间温度就设为4～7℃。在不同的季节，实验室的夜间温度可能比正常工作日的温度高或低，这种温度的变化就会使色谱峰离开“保留时间窗”，造成连续进样中产生一系列的无效数据。

还有一个可能的温度影响因素就是色谱仪器在实验室的位置。当色谱柱正对着空调的送风口时，虽然整个实验室的温度非常稳定，但色谱系统的温度就会不断的变化。这就是我们要使用柱温箱的原因之一。

• 梯度保留

温度变化对梯度洗脱和等度洗脱的影响趋势是一样的。即便如此，若梯度洗脱时不控制温度的话，保留值一般都会有较大的变化。

我们发现柱温在液相色谱梯度洗脱过程中扮演了一个重要的角色，首先，提高柱温可以缩短保留时间，其次，我们看到柱温还可以影响选择性，Z后，温度的不平衡会导致峰扭曲变形。这些提醒我们，如果想得到稳定可靠的分离结果，色谱柱的温度变化是不可忽视的。

11

为何会基线漂移

1、柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器)

2、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移)

3、流通池被污染或有气体

4、检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线)

5、流动相配比不当或流速变化

6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时

7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成

8、样品中有强保留的物质(高k’值)以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线

9、使用循环溶剂，不提倡。未调整检测器

10、检测器没有设定在Z大吸收波长处

• 解决方法

1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器

2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用在线脱气或氦气脱气

3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池，如有需要，可以用1n的硝酸。(不要用盐酸)

4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗

5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速

6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10～20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。使用离子对试剂、缓冲盐更应注意平衡柱

7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

8、改变分析条件。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子

9、重新设定基线。使用新的流动相

10、将波长调整至Z大吸收波长处。重选检测波长

12

规则的基线噪音是如何产生的

1、在流动相、检测器或泵中有空气(尖锐峰)

2、漏液

3、流动相混合不完全

4、温度影响(柱温过高，检测器未加热)

5、在同一条线上有其他电子设备(偶然噪声)

6、泵振动

• 解决方法

1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2、检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。

3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

4、减少差异或加上热交换器

5、断开lc、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。采用精密级稳压电源。

6、在系统中加入脉冲阻尼器

13

不规则的基线噪音是如何产生的

1、漏液

2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成

3、流动相各溶剂不相溶

4、检测器/记录仪电子元件的问题

5、系统内有气泡

6、检测器内有气泡

7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。

8、检测器灯能量不足

9、色谱柱填料流失或阻塞

10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常

• 解决方法

1、检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液

2、检查流动相的组成

3、选择互溶的流动相

4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正

5、用强极性溶液清洗系统

6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器

7、用1n的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池

8、更换灯

9、更换色谱柱

10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置

在下期内容中，我们将继续对出现保留时间漂移、鬼峰、峰拖尾、倒峰等问题的原因以及实验室常用脱气方法、评价色谱柱的基本指标等内容进行解析，敬请期待哦~

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*内容来源 实验室经理人，侵删

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3.鬼峰问题                                                    

3.1.等度分离中出现的意外宽峰是因前次运行产生的峰洗脱延迟（在等度分离中，前次运行中的迟洗脱组分以宽峰的形式意外出现）。

对于等度分离，保留时间越长，峰应（色谱峰）越宽；但色谱图狭窄区域内的所有峰应具有大致相同的峰宽。如图11（箭头）所示，当窄峰中出现宽峰时，可能是因为之前注射（前次进样）的化合物发生了洗脱延迟。这很容易检查。

只需进行正常注射（进样），但将运行时间延长两到三倍。如果在正常运行时间结束后出现峰值（出峰），那就是因洗脱延迟导致的。

可以通过延长正常运行时间，以涵盖此峰的洗脱（洗脱时间将峰洗脱出来）；也可以在每次运行结束时加入强溶剂冲洗液，以（来）清洗柱中的顽固物质。

图11.峰延迟洗脱通常在38.5分钟时出现（迟洗脱峰（正常情况下在第38.5分钟出现的洗脱峰）），位于（出现在了）下一个缩短的等度运行的色谱图的12.0分钟（箭头）处。来源[6]。

3.2.通过运行非注射（无进样）空白梯度并观察基线，可以分离梯度运行中的鬼峰。

如图12a所示，当空白梯度出现过多的峰时，试剂污染可能是导致此问题的原因之一（可能是溶剂污染所致）。

在这种情况下，图12a显示运行过程中的峰值（峰）非常小（1-3 mAU），并且在0.8-1.0 AU范围内的主要成分分析中几乎没有峰值（对0.8-1.0 AU大小的主要成分检测峰没有影响）；但是对于稳定性（性指标检测）或杂质的测定，1-2 mAU范围内的峰值应需要量化（也需要定量）。

在这种情况下，则需要进一步的研究。

在梯度运行之间的平衡期间，流动相中的非极性杂质一般沉积（聚集）在柱的顶部位置。然后，在梯度过程中，像其它峰一样，这些杂质被洗脱出来。

通过将平衡时间延长至三倍，检查问题的根源。如果空白梯度中的峰值（峰）增加约三倍，则水状溶剂Z有可能是问题的致因（则极可能是水溶液中的杂质所致）。

如图12b所示，可将水和/或添加剂换成纯度较高的成分，以解决这一问题。

图12. 运行空白梯度：（a）A容器受到污染的水（A容器中溶剂有杂质）和（b）A容器中纯度较高的水。色谱柱：150x4.6mm C18；1.5mL/min；35℃；在255 nm处进行UV检测。梯度：0-83％ACN /水运行13分钟，并保持5分钟。来源[7]。

3.3.等度或梯度运行的负峰不如正峰常见（相对于正峰较为少见），但也会发生。

负峰在离子对或其它方法中更为常见，其中流动相试剂在选定的检测波长下具有显著的紫外线吸光度（倒峰在有离子对或流动相在检测波段下有明显紫外吸收的情况下更为常见）。

在这种情况下，背景吸光度将极为重要（背景吸收可能较显著）（可能为0.5 AU或更多），但不会被注意到（较难觉察），因为系统在每次运行开始时会自动调节至零点，并检测信号。

如果化合物的吸光度低于流动相背景（背景吸光度），其会显示为负峰。

致因的确认和峰的消除方式与正峰相同（确认问题来源并消除倒峰的方法与正峰相同）：检查水、试剂或样品的制备过程。

近年来随着高效液相色谱仪的检测器灵敏度和色谱柱峰容量的提高，可以在极低浓度下进行检测，但鬼峰问题却成为了人们关注的焦点。恒谱生今天就跟大家聊聊鬼峰产生原因和解决措施吧!

一、什么是鬼峰：
       如果化合物出现的时间少于预期的保留时间,则称为鬼峰”。这将显示为与注入同一色谱图的化合物具有不同保留时间的峰。色谱中的鬼峰是在小于预期保留时间的间隔内出现的不需要的峰。这些峰通常是由其他化合物或代谢物与溶剂和固定相的相互作用引|起的,这会导致分离度降低，使评估分离质量变得困难。

二、鬼峰的来源：

      鬼峰的来源通常分为三类：目标物质以外的杂质、LC仪器的内部污染和流动相中的杂质。

(1) 仪器中的杂质

      仪器中产生鬼峰的最常见原因是进样器造成的残留。当将针头浸入小瓶中吸取样品时，样品中的物质会成为残留物的来源，因为它们可以吸附到针头的内外表面。那些即使在针头冲洗后也没有被去除的物质被带到下一个分析中，并以鬼峰的形式出现。由于即使在多次空白分析（仅注入流动相的分析）后也会出现表现出特别强吸附的物质，因此可能很难将自动进样器识别为鬼峰的来源。

(2) 样品中的杂质

      当样品中存在与目标化合物吸收波长相同的杂质时，就会产生鬼峰。由于来自样品的鬼峰不会出现在空白注射中，因此确定来源相对容易。

(3) 流动相中的杂质

     ①流动相中因长时间使用而产生有机物或空气中的有机物溶解在流动相中

     ②由于长期用新流动相补足现有流动相而不是每天或为每组样品准备新瓶而导致流动相被污染

     ③使用受污染的有机溶剂和/或水制备流动相

     ④使用受污染的流动相试剂

三、出现“鬼峰”怎么办：

       如果早期峰是由于样品引起的，那么它实际上不是鬼峰，而是分析中需要考虑的真实样品峰。光散射是表征这些大聚集峰的一个很好的工具，因为即使没有可用于确定摩尔质量的浓度信号，仍然可以确定大小（RMS 半径）和数密度。如果样品中大颗粒的峰渗入其他样品峰，您可以调整目标样品峰的基线以排除较大颗粒的贡献。如果空白注入也能看到鬼峰，那是真正的鬼峰了。

       要消除或防止这些鬼峰：在加载和注入步骤中使用压力变化最小的 HPLC 系统。请注意，加载期间的压力仅显示在前面板上，通常不是 HPLC 数据文件中记录的数据的一部分。如果鬼峰或系统峰在多次空白注射中可重现，您可以使用 ASTRA 的基线减法程序从样品注射中减去空白注射的光散射基线。选择脱落最少的液相色谱柱。逐渐改变流速（不超过 0.1 mL/min2）以防止大的压力变化冲击色谱柱。

       恒谱生的鬼峰捕集去除柱（又称鬼峰捕集小柱）可以有效吸附流动相中的杂质，从而缩短了方法验证和杂质分析的时间。鬼峰捕集去除柱主要的特点是能够去除溶剂包括有机溶剂中的杂质。反相色谱梯度分析时，将鬼峰捕集小柱安装在梯度混合器和自动进样器之间，不仅能够去除流动相中的杂质，还可以有效捕集管路和混合器中的杂质。

       今天恒谱生分享的知识先到这啦，希望对您的工作有所帮助！