如何用电脑绘制HPLC色谱图
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我在去年做了一HPLC色谱图,由于仪器落后不能存图只能打印,结果因为搬迁连打印图也丢失,由于样品难处理不便再做,可我清楚的记得图形,谁能告诉我怎样在电脑上做出需HPLC专业人士解... 我在去年做了一HPLC色谱图,由于仪器落后不能存图只能打印,结果因为搬迁连打印图也丢失,由于样品难处理不便再做,可我清楚的记得图形,谁能告诉我怎样在电脑上做出 需HPLC专业人士解答 展开
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- 往事如梦147 2015-05-31 00:00:00
- 一是用Photoshop,扫描一张类似的打印图,图形部分手动绘制,积分值等数据部分要相应的修改。 二是把流出曲线的二维数据(csv的,或txt的),导入工作站的数据文件,这个难度比较大,涉及到软件编程,具体的也不太懂
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- 仴愮愰亾彷徨 2016-01-18 00:00:00
- 方法如下: 精密取相应对照品,加适当的溶剂溶解,分别精密量取1、2、3、4、5ml(或相应成梯度的量),稀释成各个梯度的溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积为纵坐标,以浓度C为横坐标进行线性回归。在Excel中就直接可以绘制GX液相色谱法标准曲线。 有的色谱工作软件能直接绘制标准曲线。 色谱法也叫层析法,它是一种GX能的物理分离技术,将它用于分析化学并配合适当的检测手段,就成为色谱分析法。色谱法的Z早应用是用于分离植物色素,其方法是这样的:在一玻璃管中放入碳酸钙,将含有植物色素(植物叶的提取液)的石油醚倒入管中。此时,玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。然后用纯石油醚冲洗,随着石油醚的加入,谱带不断地向下移动,并逐渐分开成几个不同颜色的谱带,继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素,并可分别进行鉴定。色谱法也由此而得名。
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液相色谱中的许多问题都能在谱图上反映出来,其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
一.拖尾峰
1. 筛板阻塞,柱子两头的过滤筛板如果堵塞,样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟,使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。需要通过反冲色谱柱,或者更换筛板。
2. 色谱柱塌陷,是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失,不能对物质形成保留,使得物质不在固定相上保留而随流动相流出,但是又还有一点柱效,因此形成拖尾。需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。
3. 有污染,即样品不在同一起跑线起跑,从后面开始跑得到达终点稍晚,表现出拖尾。更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上,以冲洗柱子。
4. 流动相PH值选择错误,如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡,离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。调节PH值可YZ分子解离,改善拖尾,对于碱性化合物,相对较低的PH值更有利于得到对称峰。
二.前沿峰
1. 样品过载,被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来,形成前沿峰。降低样品含量。
2. 样品溶剂选择不恰当,当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰,例如,在反相色谱中用已腈做样品溶剂,而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。
3. 色谱柱损坏,色谱柱柱效损失,不能对物质形成保留。更换色谱柱。
4. 在大峰前有小峰出现,假象前沿峰,即大峰前包埋了没有分开的小峰。调整流动相洗脱梯度。
三.基线漂移
1. 柱温波动,即使是很小的温度变化都会引起基线的波动,通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。使用柱温箱,控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器。
2. 流动相不均匀,流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。使用HPLC级的溶剂,流动相在使用前进行脱气处理。
3. 流通池被污染或有气体。用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。
4. 流动相配比不当或流速变化。更改配比或流速,为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
5. 样品中有强保留的物质,以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。
四.出现宽峰
1. 色谱柱污染或失效,造成塔板数降低。更换同样类型的色谱柱,如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。
2. 柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大。更换内径较小的短管路。
3. 检测器对反应时间或池体积响应过大。减少响应时间或使用更小的流通池。
五.基线噪音
1. 在流动相、检测器或泵中有空气(尖锐峰)。流动相脱气,冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
2. 漏液。检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。
3. 流动相混合不完全。用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂。
4. 温度影响(柱温过高,检测器未加热)。使用柱温箱,减少温度差异或加上热交换器。
5. 在同一条线上有其他电子设备(偶然噪声)。断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。 采用精密级稳压电源。
六.分离度不够
1.流动相梯度洗脱设置不合理。优化梯度洗脱程序。
2.流动相污染或变质(引起保留时间变化)。重新配置流动相。
3. 保护柱或分析柱阻塞。去掉保护柱进行分析,如果必要则更换保护柱;如果分析柱阻塞,可进行反冲;如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序;如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱。
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