全部评论(1条)
-
- go小飞454 2018-03-11 00:00:00
- 荧光定量PCR法检测的是SYBR Green掺入到双链DNA中的量。SYBR Green掺入到双链DNA中后会发出荧光。但是只要是双链,它都掺。 而探针法是当探针结合到目标序列上以后,聚合酶降解探针后,探针上自带的荧光基团离开淬灭基团,从而发出荧光。 从两者的原理上来看,不难判断,荧光PCR法更加简单方便,而且成本低。而探针法特异性更强。
-
赞(19)
回复(0)
热门问答
- 荧光PCR法与PCR荧光探针法有何不同?
- 荧光PCR法与PCR荧光探针法有何不同?为什么在国家药监局查到一个生产厂家有两个方法?... 荧光PCR法与PCR荧光探针法有何不同?为什么在国家药监局查到一个生产厂家有两个方法? 展开
- 荧光PCR法与PCR荧光探针法有何不同
- pcr荧光探针法准确率高不
- 马达法辛烷值与研究法条件有何不同
- 实时荧光PCR法的质控要求及评价指标
1、为什么实时荧光PCR法要用质控
由于在样本处理、核酸提取、PCR扩增整个过程中存在试剂/设备不稳定、核酸提取效率低、样本交叉污染等问题,所以需要设置质控体系监控核酸提取和PCR扩增全过程。质控体系可以降低实验误差,保证样本检测的准确性,同时避免检测过程中的假阴性和假阳性。
2、质控体系质控品的组成
阳性对照(PC):监控系统故障,一般为含目的成分或片段的质粒。
阴性对照(NC):监控反应体系污染情况,一般为不含目的成分或片段的质粒。
无模板对照(NTC):监控反应体系污染情况,一般为去离子水。
内标(内参):校准生物学误差,判断核酸提取有效性及扩增效率。
重复实验:降低其余误差,一般为2-3次以上。
GB∕T38164-2019 动物源性成分检测方法质控品设置示例
动物源性检测操作中对内参基因18SrRNA进行检测的方法可在第二通道中进行设置。单通道产品则可在B槽中进行,设置同A槽。
3、质控体系设置要求及过程控制
一般无特殊要求的实验需要设置阴阳性对照,如非洲猪瘟病毒检测(TCVMA 5-2018),食源性致病菌检测等(SNT1870-2016),要求严格的实验还需设置内参并进行2-3个平行实验,如动物源性检测(GB∕T38164-2019),转基因定量实验等(GBT19495.5-2018)。
对于涉及人体样本的临床诊断而言,除质控品设置外,还需对整个核酸提取和PCR扩增过程进行质量控制。如诺如病毒检测(GB 4789.42-2016),新冠病毒检测等。
在实际实验过程中,需综合考虑实验环境、操作流程、实验成本等实际条件,以便选择适宜的方法进行质量控制。
(1)扩增控制示例(A5-A7)
GB 4789.42-2016 诺如病毒检验 扩增控制示例
规则:YZ指数<2.00,扩增实验成立,反之,则反应无效。
方法:YZ指数=A6Ct值-A5Ct值,满足条件,则使用A1孔Ct值作为结果;若不满足,则判断A7Ct值-A5Ct值,满足条件后则使用A2孔Ct值作为结果;若两个反应孔YZ指数均≥2.00,则反应无效。(反应结果为阳性时也可酌情判定为阳性)
(2) 核酸提取过程控制(A8-B4)
GB 4789.42-2016 诺如病毒检验 核酸提取过程控制示例
规则:若核酸提取效率≥1%,则核酸提取有效。若提取效率<1%,则需重新检测(反应结果为阳性时也可酌情判定为阳性)
方法:通过B1-B4孔建立标准曲线(PC2浓度为1)。核酸提取效率=A8孔Ct值对应的浓度×100%。
4、实时荧光PCR法诊断试验的评价指标
(1)真实性评价
①:灵敏度:也称真阳性率,即实际有病且按该诊断试验被正确地判为有病的概率。
②:特异性:也称真阴性率,即实际无病按该诊断试验被正确地判为无病的概率。
③:假阴性率:也称真阳性率,即实际有病但根据该诊断试验被定为非病者的概率。
④:假阳性率:即实际无病但根据该诊断试验被定为有病的概率。
(2)可靠性评价
①:变异系数:当做定量试验时,可用变异系数来表示可靠性,即所测平均数的标准差与测定的均数之比。
②:符合率:指同一批研究对象两次诊断结果均为阳性与均为阴性的人数之和占所有进行诊断试验人数的比率。
- 直接PCR测序法与Sanger法测序是一样的吗
- 纸层析法与薄层层析法操作上有何不同
- 热线法测量导热系数,与稳态法有何区别,适用场合有何不同?高分求教。
- 查询有关资料后,通过导热系数定义来看,本人感觉稳态法测量导热系数更直观,但本人有一设计需用热线法测量,此法公式推导及理解上相比较为繁琐,求教各位大大此法优缺点,谢谢! PS:本人学自动化,做此类设计对今后毕业有帮助吗?请大大们告知,谢谢!
- PCR与DNA复制有何异同?
- PCR与DNA复制有何异同?
- 不同核酸提取方法对荧光PCR定量结果有何影响
- 冷原子吸收法测汞时,与通常的AAS法有何不同?
- realtime PCR引物和一般引物有何不同
- HBV-DNA 乙肝病毒DNA 检测结果 1.53×10~3IU/ml 检测方法 PCR―荧光探针法
- 检测范围是0.5*10~3―1.0*10~8... 检测范围是0.5*10~3―1.0*10~8 展开
- 简述电位溶出法的基本原理与溶出伏安法有何不同
- 螯合滴定法和酸碱滴定法比有何不同?
- 酶法多肽与传统多肽合成法有什么不同
- abi7500荧光pcr仪用什么pcr管
- 用于基因分型的荧光探针PCR原理是什么
- PCR的原理及荧光探针我都明白,但是用于基因分型的实时PCR的原理是什么呢?探针是如何设计的,怎么就能分型呢?我说的是TaqMan-MGB探针合成,不是普通的PCR... PCR的原理及荧光探针我都明白,但是用于基因分型的实时PCR的原理是什么呢?探针是如何设计的,怎么就能分型呢? 我说的是TaqMan-MGB探针合成,不是普通的PCR 展开
- 蒸汽吸附的“重量法”与“容量法”仪器有何区别
- 关键指标重量法容量法定量方式通过称量吸附前后的重量变化来确定吸附量,简称“重量法”。通过一定容积内吸附前后的压力变化,根据“理想气体状态方程”计算得到吸附量,简称“容量法”或“体积法”。核心定量部件微量天平重量传感器的精度通常比压力传感器的精度高1-2个数量级。压力传感器千分之一的读数精度是压力传感器的Z高精度,但相对微量天平的读数精度较低。主要吸附质种类有机蒸汽、水蒸汽、气体。定量方式不依赖于理想气体状态方程,只依赖于重量变化,故不仅可以测试气体吸附,更在蒸汽类吸附质方面具有了先天性优势。气体由于理想气体状态方程对于蒸汽的定量范围窄,误差较大,所以容量法只适合进行气体定量,对与理想气体相差较大的蒸汽,其定量误差较大。吸附动力学分析可以可得到等压吸附速度数据,可进行气体、蒸汽的吸附动力学分析、水活度分析等。不可以由于是根据吸附前后压力变化来定量,所以无法得到等压吸附速度数据,无法进行吸附动力学分析,只能给出变压吸附速度曲线。脱气预处理可以获得脱气预处理过程中的温度、重量、时间三者之间的关系的“热重”曲线,可准确获知样品是否恒重,从而得知是否处理“干净”。只能根据经验设定一定的脱气时间,具体样品是否脱气“干净”,无法获知。(一般采取在允许条件下的尽量增长脱气时间,采用降低效率的方式来保证脱气效果。)是否测试温区分布否直接称重,定量与温度区域无关,误差因素小。是由于需要知道各个温区内的“剩余”气体量后才能知道样品的吸附量,所以需测试温区分布,具有较多误差引入源。
(来源:贝士德仪器科技(北京)有限公司)
- 瞬变电磁法与谐变电磁法有何异同
9月突出贡献榜
- 单位预算忏悔
- 饿啊地方
- 空中有牛
- 依然相信你会
- 本生(天津)健康科技有限公司
- 猫合宝
- 广东皓天检测仪器有限公司
- 武汉安德信检测设备有限公司
- 上海一科仪器有限公司
- 牛牛麻麻2
- 东莞市皓天试验设备有限公司
- futu888
推荐主页
最新话题
参与评论
登录后参与评论