酶联免疫吸附试验（ELISA）基本原理是什么？

木面书生326 2013-09-10 01:38:44 344 浏览

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dasjdjk 2013-09-11 00:00:00

1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，Z后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。　 http://www.bio1000.com/zt/dna/201562.html 质粒提取，质粒载体，质粒基本特性，质粒构建，质粒载体的构建及应用，质粒提取方法原理，质粒提取注意事项，质粒载体结构，生物帮上面有详细的介绍。

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ELISA检测试剂盒试验需恪守的原理

　　ELISA检测试剂盒试验需恪守的原理

　　ELISA检测试剂盒的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

　　ELISA检测试剂盒可以用于：(1)检测大分子抗原和特异性抗体等;(2)具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

　　ELISA检测试剂盒实验中的血清需采用血管收集血液，室温血液自然凝固30分钟，1000xg离心15分钟左右，收集上清，分装后，标好号，-20°C或-80°C保存。运输是用干冰。

　　把ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。对于一个旨在分离CD4阳性T的试剂盒来说，操作流程主要有以下几步。首先，将样品与anti-CD4抗体包被的磁珠共同孵育，使抗体与CD4+T结合。然后洗去不需要的非目标(即不表达CD4的)，留下磁珠-抗体-复合物。将上述复合物与能结合anti-CD4抗体的二抗一起孵育胞，形成磁珠-抗体-二抗复合物。我们可以用磁铁去除这种磁珠-抗体-二抗复合物，而所有的CD4+细胞留在上清中。ZH，只需将上清转移就可以进行下游研究了。

　　ELISA检测试剂盒试验有必要恪守以下3个ZX原理：

　　(1)抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并坚持其免疫学活性;

　　(2)抗原或抗体可通过共价键与酶衔接构成酶结合物，而此种酶结合物仍能坚持其免疫学和酶学活性;

　　(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可依据参加底物的色彩反响来断定是否有免疫反响的存在，并且色彩反响的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，ELISA检测试剂盒可依据已知浓度的抗原或抗体的色彩反响的深浅制作规范曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。

　　ELISA检测试剂盒试验需恪守的原理先和大家介绍到这，如果想要了解更多Elisa试剂盒的信息，可以关注天津本生，本生给生物医药客户提供生物实验室检测试剂及耗材，欢迎广大客户来询。

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