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聚合物填充体系的界面作用

一、聚合物填充体系的界面作用概述

聚合物填充体系是一种由多种聚合物材料混合而成，可以形成高强度、低密度、耐腐蚀、耐热和抗磨损的复合材料。而这些性能的关键之一是聚合物填充体系的界面作用。界面是指不同物质之间的分界面或接触面。在聚合物填充体系中，不同材料之间的界面非常重要，因为它们决定了复合材料的终-极性能。

二、聚合物填充体系的界面作用的影响

首先，聚合物填充体系的界面作用影响着强度。这是因为不同材料的化学性质和物理性质会有所不同，它们之间的接触面可能存在着较大的形变、拒水性、表面能等差异。如果界面作用不足，会对复合材料的强度产生负面影响。

其次，聚合物填充体系的界面作用影响着耐腐蚀性。界面作用的存在可以减少复合材料中不同材料之间的裂痕和微小缺陷，从而降低腐蚀物进入复合材料内部的风险，并能在一定程度上保护填充体系不被外部环境的损伤影响。

此外，聚合物填充体系的界面作用还影响着复合材料的热分解温度。由于复合材料通常由多种材料混合而成，不同物质之间的界面会影响到分子链的热行为和分解温度。如果界面作用足够强，则分子链之间的相互作用较强，导致复合材料的分解温度会升高。

聚合物填充体系的界面作用是复合材料中一个非常关键的环节。只有充分理解了材料之间的界面，才能够有效地设计出高性能、高强度的表面复合材料，为各行业提供更稳定、可靠的产品。

三、低场核磁研究聚合物填充体系的界面作用

纽迈VTMR20-010V-I小核磁（台式核磁）可以提供全面的科研解决方案，适用对象涵盖从橡胶等弹性体材料到生物领域的膜材料和纳米材料等多种物质。可以利用纽迈VTMR20-010V-I小核磁（台式核磁）研究共聚物界面相容性。小核磁（台式核磁）不仅仅提供单个的检测值，无损、快速、便捷的分析过程为工艺改进、过程研究等提供全程、长时间的在线监测。

以下为用小核磁（台式核磁）研究共聚物界面相容性的部分相关案例

前言

聚合酶链式反应（PCR）是用于扩增特定DNA片段的分子生物学实验技术。实时荧光定量PCR（以下简称qPCR）作为第二代PCR技术，自1996年推出以来，已经广泛应用于基因表达分析、病原微生物检测、动植物育种等许多研究领域，为了获得最理想的检测结果，qPCR从样本采集、核酸提取、cDNA合成到上机检测的流程有许多可以优化的参数。

qPCR实验的工作流程首先需要确定研究的目的，根据实验设计规划好实验分组、重复次数等细节。接下来分为样本准备和引物探针验证两个重要的步骤。样本准备主要是核酸提取逆转录等步骤，引物探针需要去测试特异性和效率。接下来需要使用qPCR仪来对样品中的目的核酸进行扩增qPCR结束后根据实验目的对目的核酸进行相对或者绝对定量。接下来讲的qPCR体系优化会围绕着这个流程展开。

1.样本的采集与处理

首先，提前做好功课，了解样本的不同分型，或者了解详细的细胞分群。如果条件允许尽可能覆盖所有的组织类型或者细胞类型。其次，尽可能增加样本数量，也就是生物学重复，从而更客观地反映生物变异程度。另外，qPCR实验也需要有技术重复来降低误差。

采样是需要严格规划的过程，比如材料的时效性、珍贵程度等，都要纳入考量范围。样品要尽量新鲜，取样尽可能快速。戴手套操作，防止污染。如果不马上提取核酸，需要-80°C保存，并尽快处理。

2.核酸的提取和检测

模板的质量直接影响到检测性能。核酸提取需要有效地将RNA或DNA从其他混合物中分离。RNA样本中的污染物——基因组DNA、DNA结合蛋白、酚类化合物或在提取RNA过程中引入的外源杂质(如手套中的粉末)——都已被证明会抑制下游实验，如逆转录和PCR扩增。核酸提取需要使用无菌无酶的试剂耗材，避免RNase或DNase污染，并对内源RNAse或DNAse进行有效抑制；多糖多酚样品要考虑多糖多酚杂质的有效去除。低温保存防止RNA或DNA降解。

降解或不纯的RNA会限制逆转录反应的效率，降低产量。部分降解的RNA可能不能给出准确的基因表达结果。对于基因的定量，必须使用高质量的RNA，这意味着需要非常仔细地检查RNA的浓度和质量。可采用高分辨率琼脂糖凝胶检测核酸质量和分光光度法（A260/A280=1.8和A260/A230=2.0）检测核酸纯度和浓度。

3.cDNA合成

RNA 质量对 cDNA 合成结果会产生重要影响。并且RNA 很脆弱，容易降解。为了保证 RNA 的完整性，我们需要非常注意，比如在冰上操作，用 RNase-free 的枪头和离心管，减少操作时间等。在反应体系中加入 RNase 抑制剂也能有效防止 RNA 降解。

如何评价样品中的杂质对逆转录的影响呢？可以梯度稀释后绘制标准曲线，如果低浓度的样品点数值偏大比较明显，基本可以判定杂质影响显著。

不同厂家的反转录试剂会有差异，对RNA中的杂质耐受程度也不同。逆转录酶在整个反转录体系中具有关键性影响。除了活性以外，逆转录酶的热稳定性同样很重要，在较高温度下进行逆转录，能够减少 RNA 的二级结构，增加逆转录的效率。

除了掌握 RNA 的完整性之外，反转录之前还需要对 RNA 浓度进行测定。一般反转录试剂盒会对上样量有要求，建议 total RNA 上样量小于 5 μg。超过这个范围，会使反转录产物产生偏好性 (表达丰度高的基因优先被反转录) 而造成定量结果不准确。

逆转录出来的cDNA可以直接放在4°C保存，若长期不用，可分装，然后-20°C保存。

4.qPCR方法的建立

① 定量方法

绝对定量：检测起始模板数的精确拷贝数，需要标准品构建标准曲线。

标准品可以是纯化的基因组DNA、质粒DNA或者体外转录RNA(cDNA)，其作用是生成标准曲线，建立Ct值与浓度之间的线性关系。

标准品与待测样品的PCR效率一致，且接近100%，与样品的性质尽可能接近，与样品相同的扩增条件（PCR体系、耗材、同一次扩增），大于或等于5个梯度稀释的标准品。

相对定量：在一个样本中，目的基因相对于内参基因的量的变化。

内参基因选择建议筛选不少于三个内参基因来归一化RT-qPCR数据。目的是消除外部样品偏差，例如总RNA含量，RNA稳定性，酶效率或样品装载量的变化。

对候选的内参基因进行qPCR 实验，得出Ct平均值以及 Ct值的标准偏差，选择SD最小的基因作为实验内参。可通过geNorm 、 BestKeeper  、 NormFinder、RefGenes 等工具来评估您的内参基因。

② 荧光标记方法

染料法：利用能与DNA双链结合的染料来实现，如SYBR Green I。该染料在游离状态下呈现微弱的荧光，一旦与双链DNA的双螺旋小沟结合，其绿色荧光增强约1000倍。因此其总的荧光强度与双链DNA含量成正比，利用这一关系可以反映生成的PCR产物的量。

TaqMan荧光探针：是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5'末端，而淬灭剂则在3'末端。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收; PCR扩增时, Tag酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。常用的荧光基团是FAM，TET，VIC，HEX。

引物探针设计可以参考Gene π网站.

③  引物扩增效率验证

标准曲线是评估PCR扩增效率最可靠和稳定的一种方法，该方法涉及到制作一系列的样品来控制目标模板的相对数量。最常用的是10倍梯度稀释样品，采用标准qPCR程序进行扩增获得Cq值，最后根据各样品浓度及相应的Cq值绘制标准曲线，得到线性方程Cq= -klgX0+b，扩增效率E=10(-1/k)-1。利用qPCR进行定量分析时，要求扩增效率范围在90%-110%（3.6＞k＞3.1）。

④  反应体系优化

▶  根据仪器类型，选择合适的耗材和qPCR试剂。

▶ 每对引物先进行预实验，确定特异性以及最适浓度。

▶  配置不同的PCR反应体系，选择每个组分合适的浓度。

▶  设置温度梯度测试引物最合适的退火温度。

▶  实验设置NTC、NRT、 NEG和POS等对照组，来监控实验体系或污染。

实时荧光定量PCR常见问题分析

1.可疑的扩增曲线

真正的扩增曲线，有特征的形状：首先背景信号，然后是三个增长阶段（指数增长期、线性增长期和平台期）。

如果不是同时具有特征性的三个增长阶段，没有典型的指数增长期，那就不存在扩增。

平台期很低也是常见的异常扩增曲线。可能是模板的浓度太低。通常如果模板的起始浓度太低, 反应体系中会形成大量的引物二聚体。大量引物二聚体的形成使得引物很快消耗完，从而造成扩增曲线的平台期很低。这种情况可通过调整引物和模板的比例。

2.异常的荧光信号

NTC出现荧光信号---引物二聚体形成或气溶胶污染，查看熔解曲线是否为单一峰。

3.扩增效率过高或过低

过低的扩增效率（<90％）可能存在的原因：

▶  移液器校准不良或移液技术差。

▶ 不正确的稀释导致标准曲线出现错误。

▶  引物设计不好或扩增子具有二级结构。

▶  标准曲线动态范围太小。

▶  Taq酶无活性或活性降低。

▶  样品抑制。

过高的扩增效率（> 110％）可能存在的原因：

▶  移液器校准不良或移液技术差。

▶ 不正确的稀释导致标准曲线出现错误。

▶  引物二聚体或非特异性扩增。

▶  标准曲线动态范围太小。

▶  基因组DNA污染。

4.重复性差

为精确定量，对每个样品都要做重复实验，复孔之间的Ct值不应超过0.5，标准偏差不大于0.2，这样，实验结果就有很好的精确度。

造成重复性差的原因：

▶  加样误差（操作或者加样器导致）。

▶ 没有将试剂和样品充分混匀。

▶  低拷贝的目的片段→泊松分布。

▶  基线阈值设定不合理。

Cielo™实时荧光定量PCR系统

Harness of the power of qPCR

☑   数据可靠性：连续1000次实验后，结果高度一致。

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Customer Satisfaction—日本电子（ZG）售后体系

--让客户放心的是产品，让客户安心的是服务--

日本电子（ZG）售后宗旨：Customer Satisfaction（用户满意）

行动方针：快速、GX

一、强大的售后网络

日本电子ZG分公司--捷欧路（北京）科贸有限公司售后部门成立于1981年，具有悠久的历史。总部设立在北京，现有7个维修站点，遍布在全国重要的省市，方便调配，及时上门服务。一直以来，我们秉承“CS用户满意”（Customer Satisfaction）的售后服务宗旨，以“快速、GX”行动方针，努力为客户提供优质的售后服务，并一贯认为良好的售后服务是企业责任感的体现，是诚信的有效延伸，是自信，也是承诺。

我们向客户提供和日本产品有关的技术服务及相关咨询，实行全国一体化管理，统一安排工程师，维修和零备件报价完全透明，并做到全国统一，使客户安心放心。

二、国际yi流的技术水平

人员配备：

售后技术服务部门现有：中方维修人员80名，主力军为具有10年以上工作经验的高级工程师，实际经验非常丰富，能在短时间内为客户解决仪器故障和技术咨询。并常年配备10名日方工程师，提供高端设备的安装维修支援和技术支持。

技术养成：

为了提高工程师的技术水平，公司每年定期安排员工赴日技术培训，提高相应维修技能及理论水平，用以为广大客户提供更好的服务。

全国一体化统一管理：区域化分工，各司其职，提GX率

我公司售后体系以北京为ZX，辐射全国，按区域划分售后服务用户群，并按照仪器类别、型号细化，针对不同仪器成立相应的售后服务部门，有针对性地应对客户的需求，做到快速响应。及时汇总各区域售后情况，总结完善，不断优化服务体系，为用户提供及时、GX、便捷的服务。

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北京和上海的维修ZX拥有庞大的库存系统，应对设备的主要和常用备件。上海分公司配有保税库，可以做到先出库后通关，极大缩短了零备件的到货时间。对于一些特定地常用耗材和备件，我们拥有日本至ZG的快速通关渠道，在很大程度上解决了客户的燃眉之急。

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我们的行动方针是“快速，GX”，保障设备正常使用，并提供维修、应用和软件等Z佳整体解决方案。

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为了更好地服务于客户，解决客户注重服务成本的要求，避免申报费用的流程冗长繁琐，我公司将致力于大力开展年度保修合同的推广。此举可以使得客户提前确定年度预算，大大减少未知支出。

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未来，我们将继续加强对新老用户的回访，强化理论知识学习，自我提高，加强并巩固维修技能，加强与客户之间的交流，尽一切可能提高客户满意度。

我们将专注专业，全心服务，追求zhuo越，尽善尽美，全力解决一切售后问题，用户满意是我们服务的宗旨。