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  go小飞454 2015-10-30 00:00:00

  蛮好用的

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  aifangaini87 2016-04-25 00:00:00

  不知道你说的是以下哪三种呢？感觉都还可以 Bicinchoninic acid (BCA )法是在世界上常用的蛋白浓度检验方法之一BCA法基础上改进而成。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu 2+ 络合并将Cu 2+ 还原成Cu + 。两分子BCA与一个Cu + 螯合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，在50-200μg/ml浓度范围内有良好的线性关系，并且受干扰物质影响小。与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。 Lowry法包括两步反应：diyi步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将Folin试剂还原，产生深蓝色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为5～100μg/ml蛋白质。Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。 Bradford法是Z常用的蛋白质快速定量方法。Coomassie brilliant blue G-250与蛋白质结合使染料的Z大吸收峰由465 nm变为595 nm，溶液的颜色由棕色变为兰色，595nm波长下吸光度值与蛋白含量成正比。灵敏度比Lowry法高4倍，与BCA法相当。反应迅速，2分钟即可达到平衡并在1小时内保持稳定。操作简便，只需要一种反应试剂。干扰物质少，钠钾镁离子、Tris、葡萄糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、硫酸氨、EDTA等均不干扰测定。提供5×染料浓缩液可进行200-400T标准2 ml比色杯检测，或2500Tmicroplate检测。

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