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实时荧光定量PCR技术是通过测定RNA的转录水平来评估基因的活力。RNA样本提取的质量直接影响基因表达分析。影响RNA品质的因素有以下三种：RNA浓度、RNA纯度和RNA完整性。

检测RNA浓度、纯度和完整性的方式主要有以下几种：

紫外分光光度计法：

测量260nm吸收值计算RNA浓度，测量260nm/280nm吸收值的比值，用于评估RNA纯度。需要注意的是：在检测核酸物质时应该在固定的PH溶液中进行。

260nm/280nm的比值范围在 1.9~2.1 之间。＜1.9，说明有蛋白质残留；＞2.1，说明RNA可能发生降解。

琼脂糖凝胶电泳：

完整的RNA通常有三条带，最亮的是28S条带，其次是18S条带，最淡的是5S条带（部分试剂盒提取时会过滤掉5S条带）。通过琼脂糖凝胶电泳可以检测28S和18S的比值。该方法主要用于检测RNA的纯度和完整性。

如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利，28S的亮度在18S条带的两倍以上，我们认为RNA的质量好。

若RNA条带出现弥散，原因可能：RNA被核酸酶降解、电压或电流过大、上样量过高或过低等。

上述两种方法在实验室比较常用，此外还有几种检测方式供大家选择。

荧光染料检测：

通过荧光染料和RNA结合，荧光活性增强。此方法的灵敏度较高，主要用于检测RNA的浓度。

微毛细管电泳：

可使用软件的RIN（RNA Integrity Number）分数评估，10为RNA完整性好，0为最差。此方法的灵敏度和分辨率较高，可用于检测RNA浓度、纯度和完整性。

3’-5’完整性检测：

是在一个RNA样本中检测GAPDH mRNA的完整性来代表所有RNA的完整性，主要用于检测RNA的完整性。

得到高品质RNA的小建议：

1、尽量避免RNA酶污染，使用无RNA酶的耗材和试剂，建议将扩增前后的场所分开。

2、尽量减少采样时间，样品处理后快速冷冻，可以加入RNA保护剂。

3、RNA提取过程中可以使用RNA酶YZ剂。

4、存储过程中避免反复冻融。

Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统

Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；ZY的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高灵敏度和高可靠性的实验结果。

       氢氧化钠 (NaOH)，也称为苛性钠，是一种强碱，极易溶于水。

当NaOH溶解在水中时，

它会形成碱性溶液，

并且是工业中常用的强碱之一。

       对于 NaOH 水溶液，浓度与密度或声速值之间存在很好的相关性。这样一来，通过测量密度和声速，就可以获得精确的浓度测量值 (图 1)。

       NaCl 的电解是Z重要的苛性钠生产方式，其中膜电池工艺是Z新的技术，其简易工艺流程图见下方 (图 2)。

       从上图中我们发现， 25-32％ 浓度的 NaOH 离开电解槽，并且必须通过测量密度 (D) 或声速(S) 来维持安全浓度，避免对膜产生损坏。在蒸发步骤中，由密度传感器控制，将 NaOH 溶液进一步浓缩至约 50%。

       大多数生产的 NaOH 以 50% 的水溶液进行交易和运输，但其他浓度也可进行商业交易。在运输 NaOH 时，必须控制货物的质量以及卸载的安全性。通过在输送到储罐之前，测量运输液体的密度或声速，即可保证这两点。通过在整个交付过程中进行连续浓度测量，就可以很容易地检查供应商是否按照合同交付。安装在化工厂加注站的 L-Dens 7400 + Pico 3000 可用于控制卡车交付。

       对于许多工艺，经过高度浓缩的化学品都是通过卡车输送并储存在不同的罐中。并在使用前将它们稀释至所需浓度。其简易的工艺流程如下所示：

       通过测量密度 (D) 或声速 (S)，即可参照所需的浓度和精确度，控制稀释过程。一个示例应用就是饮料或食品制造商对于 CIP 化学品的稀释。

       由于 NaOH 溶液的强碱性质，需要使用特殊的材料和仪器。安东帕提供两种设置，专为在线测量二元 NaOH 溶液的浓度而设计。

       ·NaOH 密度监测仪：L-Dens 7400 INC 版本 + Pico 3000 模拟版本

       ·NaOH 声速监测仪：L-Sonic 5100 MON 版本 + Pico 3000 模拟版本

       就使用 L-Dens 7400 INC 版本密度传感器对 NaOH 溶液进行连续密度测量。该传感器采用 Incoloy 825 制成的接液部件，可以直路或旁路安装在主线上可以删除了。

       使用 L-Sonic 5100 MON 版本测量 NaOH 溶液的声速。该传感器采用 Monel 400 制成的接液部件，使用 DN 50 或 ANSI 2” 法兰直路连接管道或搅拌容器。

       对于这两种设置，都使用 Pico 3000 变送器自动计算温度补偿浓度值。

       针对NaOH溶液测量规范以及参数如下：

       安东帕创建于1922 年，总部位于奥地利。安东帕在密度和浓度的测量，溶解二氧化碳的测定，以及在流变学和粘度测量领域处于世界ling先地位。致力于为工业和科客户提供Z合适的仪器，产品范围涵盖密度计、微波消解仪、微波合成仪、旋光仪、折光仪、黏度计、流变仪、馏程分析仪、闪点测试仪、x射线结构分析、固体表面电位分析仪、表面力学性能测试仪器、在线分析检测仪表、颗粒特性分析、原子力显微镜以及固体材料直接表征等。