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  longwub 2010-12-15 00:00:00

  首先了解你需要的目的基因存在于哪种生物内，用试剂盒提取总基因，查找目的基因序列，设计引物，就可以用PCR扩增了

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  sijie199396 2010-12-15 00:00:00

  PCR技术是DNA扩增技术，它能在比较短的时间内产生大量的DNA。在获取目的基因后才使用PCR技术。 获得目的基因的方法： 一、构建基因文库 提取总DNA。 用限制性内切酶将总DNA切成小片段，连到质粒或噬菌体载体上，把这些质粒转化到细菌，随着细菌繁殖而复制，这个过程又称为基因克隆（gene clone） 将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，便构成了该生物的基因文库（gene library）。 二、反转录人工合成互补DNA 细胞核中转录的mRNA，已经加工去除内含子，只有外显子（编码蛋白质的序列），比构建基因文库优越，因此，先从细胞中提取所需的mRNA。 以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下，合成互补的DNA片段(complementary DNA， cDNA)，在逆转录完成时， mRNA被降解。在大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段的作用下，再以diyi条DNA为模板，合成另一条互补DNA链。 优点 在细胞分化各阶段细胞往往转录出特异的编码特殊蛋白质的mRNA。因此，用cDNA方法获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因。

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