微生物实验中培养基的配置应该注意什么

明年今日呢i 2015-10-28 01:25:45 410 浏览

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张小星156 2015-10-29 00:00:00

1、常用玻璃仪器的准备制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，晾干后备用.（1）平皿用纸或布包好，或装在金属盒内，于121℃高压蒸汽菌3min后烘干，备用.（2）试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好，再用布或报纸包扎好，121℃高压蒸汽灭菌20℃后烘干，备用.（3）吸管及滴管先用少许棉花塞于吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽内的气体污染），然后用纸包后或装入金属吸管筒内，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用.其他玻璃器皿均应按上法处理，也应装金属筒内160℃干热灭菌2h后，备用.2、培养基的制备及储存（1）溶化：一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内.加入蒸馏水，隔水加热以促其溶解，加热时应经常搅拌，防止焦结，待其溶解后补足水分.在使用干燥培养基时，先将蒸馏水按定量加入容器中，然后称取一定量培养基干粉放入水中，静置10—15min，搅拌，振荡，或延长时间以促进溶解，一般不要热，必要时加热，但时间不宜过长，温度不宜过高，避免某些营养成分被破坏.（2）校正酸碱度（调节pH）：培养基必须有适当的pH.因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一，测定pH的标准温度为25士2℃.调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液.当调节缓冲液的pH时，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液.灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低，一般高压灭菌前培养基的pH会比Z终pH调高0.2左右，灭菌后基本合适.因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定，并记下每次pH的测定结果，有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性，从而指导灭菌前pH的调节.干燥培养基一般已校正过pH，用时也必须再验证.测定时，一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化，或用pH计校正，如与所需pH不符，可用以上的酸或碱液加以校正.调整pH后要加热过滤，使培养基澄清.（3）培养基的分装：大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认.每次使用前后，均要对分配器的管道系统进行冲洗，在分装无菌培养基前，则要采用无菌硅胶管.固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中，高压灭菌后根据需要分装平皿或试管.平皿：倾注平皿，应在无菌室中放置3—4h，如用塑料平皿须在35℃培养箱中倒置30—60min.让水蒸汽自然蒸发.斜面：制备低层斜面分装于试管，约占容积1/5，灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上，使成斜度，分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基，如沾有培养基应用布抹去，以避免污染.高层斜面：制备高层斜面分装于试管，约占试管容积的1/3，灭菌后趁热放置成高层短斜面，待其凝固后应用.分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天（2h内Z佳）进行灭菌处理.液体、半固体培养基一般在高压灭前分装，约装试管容积的1/3，在灭菌后还要加其他成分的液体、半固体培养基，灭菌后再分装于灭菌试管或锥形瓶中.培养基的灭菌：培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌，各种培养基的灭菌时间和压力，按其成分不同而定.普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌15min，但容器和装量较大时，应延长至20min.含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min.含糖、血清、鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，连续3d，间歇灭菌.血清或组织液，采用低热56—58水浴1h，连续5—6d灭菌，一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等，可用细菌过滤器，过滤CJ.高压灭菌应严格按照操作规程执行，必须逐渐加热，彻底排除灭菌器内的空气，再逐渐升压保持预定的压力和时间，达到全部杀灭微生物.以上的灭菌时间和温度要经过验证确认，如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好.

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1、添加供试液时的液体高度不能超过滤杯大刻度。
2、随时注意抽滤瓶情况，液体不能淹没进气口。可以根据实际情况选择抽滤瓶的容积。
3、若无菌室采用化学剂消毒时，将仪器置密封罩内，或搬出无菌室，以免损坏电子部件腐蚀金属部件。
4、环境温度控制在10℃～30℃。相对湿度≤80%RH无水珠凝结现象。
5、当供试品中含有不溶性的颗粒，悬浮物时，可能导致滤膜堵塞影响过滤，应将供试液进行预处理，出去颗粒或悬浮物。
6、抽滤前，应确保管道密封性良好。
7、微生物限度检查仪有效接地。
8、每次使用结束后，仪器表面用酒精擦拭。
9、使用一次性微生物限度过滤器，打开无菌包装前，先检查包装是否破损。
10、根据供试品性状来选择滤膜材质，过滤前后应保证滤膜的完整性。
11、仪器不工作时，断开电源。仪器待机时，将电磁阀关闭，设置为“off”状态。
12、不能抽滤强酸､强碱､强氧化剂､强腐蚀等液体。
13、根据供试品性状来选择滤膜材质，过滤前后应保证滤膜的完整性。
14、仪器不工作时，请断电。
15、不能抽滤强酸、强碱、强氧化剂、强腐蚀等液体。
16、当供试品中含有不溶性的颗粒，悬浮物时，可能导致滤膜堵塞影响过滤，应将供试品进行预处理，除去颗粒或悬浮物。
17、抽滤前，应确保管道密封性良好。

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