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　　如何减少ELISA试剂盒实验中背景因素?

　　ELISA试剂盒实验的原理在我们平时看来觉得很简单，无非就是固定抗原，添加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗涤和闭。然而，即使是平常的洗涤和封闭，如果做得不太好，也有可能影响整个实验。在做完实验时，我们是否能获得有用的信息，这在很大程度上取决于结果的信噪比。背景噪音会直接关系到结果的判断。那么怎样才能降低ELISA试剂盒实验中的背景因素呢，我们一起来了解。

　　洗涤很重要

　　洗涤步骤看似很无聊，其实很重要，因为如果未结合的材料(如非特异结合的抗体或检测试剂)残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。

　　封闭更关键

　　封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高，怀疑封闭不充分，那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。如果您一直被背景问题所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。zui常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%)，它会降低特异结合，产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。蛋白封闭液则有所不同。它们与开放位点结合并封闭，同时稳定与微孔板结合的抗原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。

　　抗体浓度须优化

　　如果试剂稍有不同，则可能需要优化抗体的量。记住，非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点，切勿使用过多的一抗或二抗。

　　检测试剂要适量

　　另一点也很显而易见：切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高，或者未正确稀释，则会导致高背景。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应加入终止液。

　　相信在注意这些细节后，我们就可以降低ELISA试剂盒实验中背景因素，才可以获得我们想要的结果信息。

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　　怎样减少ELISA检测试剂盒实验中的误差?

　　ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。ELISA检测试剂盒试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。但是您知道吗?如果您在实验过程中犯了以下几个小错误的话也会出现实验误差的哦!下面跟随天津本生小编来看看下：

　　1.做实验时少说话，防止唾液掉进酶标条中。

　　2.加入一抗二抗需要放入37°。

　　3.如果同时做多个板子，多个板子别罗一起;尽量少用排枪。

　　4.加样时，由低浓度向高浓度加，这样减少跳孔的几率。

　　5.勤换枪头。

　　注：

　　一、移液器的使用，加样(抗体)等需要准确定量的试剂时不使用排枪，经验证明排枪很不准确，极易跳孔，不要图便宜买低档的tips 因为ELISA不但会放大被检测的目的蛋白，也会放大非特异结合的杂质蛋白。

　　二、倍比稀释样品时，稀释倍数要小于10。

　　三、所有的装跟ELISA检测试剂盒相关试剂的容器，玻璃制品的要干烤过或者使用一次性的树脂容器。

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