如何获得高纯度植物基因组DNA

那日的疯狂 2018-12-07 19:32:02 336 浏览

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提取植物基因组DNA，DNA是绿色的: 我用的是CTAB法提取植物基因组DNA，方法如下：1.称取材料0.2g，加入适量PVP，500µl冰冷CTAB，20µl冰冷RNA酶研磨；2.研磨后加入500µl加热的CTAB，装入1.5ml离心管中... 我用的是CTAB法提取植物基因组DNA，方法如下： 1.称取材料0.2g，加入适量PVP，500µl冰冷CTAB，20µl冰冷RNA酶研磨； 2.研磨后加入500µl加热的CTAB，装入1.5ml离心管中； 3.充分混匀后，65℃水浴1h，期间不时轻缓震荡； 4.12000rpm离心10min，取750µl上清液至另一离心管中； 5.加入等体积的Tris饱和酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），摇匀后12000rpm、离心10min； 6.取上层清液650μl，加入等体积氯仿·异戊醇（24:1），摇匀后12000rpm离心10min； 7.取550µl上清液至另一离心管中，加入等体积异丙醇； 10.-20℃放置1h或室温下过夜； 11.12000rpm离心10min，倒弃上清液；70%冰冷乙醇洗涤沉淀2次； 12.倒弃上清液，风干沉淀； 14.加100µlTE溶解DNA，-20℃保存备用。可是不知道为什么Z后异丙醇沉淀出来的DNA居然是深绿色的，已经接近黑色了。有的时候同样的步骤做出来的又是白色或者黄色的，这到底是怎么回事啊！希望知道的人给我个提示！会不会是因为和氯仿-异戊醇反应的时间过长？因为我发现我剩下的那些材料过一段时间后都变得很绿。展开

在植物基因组DNA提取过程中β-巯基乙对DNA的影响？: 我们用的是CTAB法，之前提过，药品配制中加了β-巯基乙醇，OD比值不行，电泳效果不理想。再次实验时，配制药品过程中没有加β-巯基乙醇，准备在加提取液时直接加到Ep管中，但是忘了，... 我们用的是CTAB法，之前提过，药品配制中加了β-巯基乙醇，OD比值不行，电泳效果不理想。再次实验时，配制药品过程中没有加β-巯基乙醇，准备在加提取液时直接加到Ep管中，但是忘了，结果OD比值接近1.7，电泳效果比之前的好。查阅文献，CTAB法基本都要加β-巯基乙醇，防止氧化，而没有涉及这种的现象的解释。求解？展开