基因芯片和荧光定量pcr的异同

巷子口beut 2017-06-09 21:59:33 1202 浏览

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wo叫大姐姐i 2017-06-10 00:00:00

基因芯片(genechip)（又称DNA芯片、生物芯片）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度Z强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。基因芯片技术由于同时将大量探针固定于支持物上，所以可以一次性对样品大量序列进行检测和分析，从而解决了传统核酸印迹杂交（Southern Blotting 和 Northern Blotting 等）技术操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等不足。而且，通过设计不同的探针阵列、使用特定的分析方法可使该技术具有多种不同的应用价值，如基因表达谱测定、突变检测、多态性分析、基因组文库作图及杂交测序等。荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。 PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时，探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。或者使用荧光染料SYBR。SYBR可以结合到双链DNA上面，当体系中的模板被扩增时，SYBR可以有效结合到新合成的双链上面，随着PCR的进行，结合的SYBR染料越来越多，被仪器检测到的荧光信号越来越强，从而达到定量的目的。

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基因芯片和荧光定量pcr的异同:

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DBI-2220 Bestar® qPCR RT Kit ( gDNA Remover )
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适应客户：医院检验科PCR实验室，验室；第三方检测机构，科研院所，大专院校，制药厂，试剂生产厂家，疾控，检验检疫。

2021-10-13 15:23:06 292 0

荧光定量PCR耗材的使用和选择注意事项！

　　高通量的96孔PCR板和8联管是在聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中，主要作为参与扩增反应的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、缓冲液等的承载物。医疗级聚丙烯(PP)材质因其极高的纯净度和稳定性，能更好适应PCR反应过程中反复高低温设定，并且能够实现高温高压灭菌操作，常常被用于PCR耗材的生随着荧光定量PCR技术的普及，该技术被广泛用于遗传、生化、免疫、医药等领域，不仅应用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA，RNA的研究领域。

　　如何正确使用96孔PCR孔板

　　PCR板有透明和乳白色可选，其中乳白色更适合用于顶部采集荧光信号的新型荧光定量PCR仪(如伯乐CFX系列，ABI 7500fast 以上型号， Roche 480系列)，但如果荧光定量PCR仪是底部光源的，则应选择透明的。

　　PCR板根据裙边设计又可分为无裙边、半裙边和全裙边三种设计模式，不同厂家的荧光定量PCR仪会设计不同的切角或边缘凸起，请选择适合该PCR仪的板子。

　　PCR板又分100ul体积(矮板)和200ul体积(高板)，根据机型的不同选择，选择不同高度孔板，避免高度错误对机器造成破坏和加热不均导致数据失真。

　　当使用96孔板做荧光定量PCR实验的时候，推荐使用光学膜代来密封反应孔。

　　加样后会在管壁上飞溅一些小液滴，另外反应体系内也会有一些气泡，需要离心去掉挂壁液滴和气泡。请使用专用的微孔板离心机解决上述问题。

　　PCR板属于一次性消耗品，生产一次成型，不建议剪开使用容易造成实验误差增加，不能清洗或部分重复利用。不要为了节省一点小钱，而给实验带来后续分析上的困扰。

　　样本量少，用8联管做实验又该注意哪些呢?

　　8联管也分乳白和透明两种，选择方式和孔板一样，根据PCR仪的荧光信号采集方式决定。

　　8联管同样也有0.1ml(矮管)和0.2ml(高管)，根据PCR仪的加热模块体积确定。

　　8联管的盖子一般有光学平盖和凸型圆盖之分，光学平盖适用于荧光定量PCR，圆盖适用于普通PCR。

　　使用单管或8联管做实验，并且样本数量不多的时候，建议在样品加热块(TRAY)上对称地安放样品，是纵向放置，并且优先放在第6列或第7列，然后逐渐向两边放置。这样做的好处是热盖压下来的时候不至于发生倾斜，各个反应管的受力和受热都比较均匀，提高孔与孔之间的数据精密性。也可以在加热模块四角的位置，放置4个单管平衡热盖压力，避免扩增少量样本时出现管子变形的情况。

　　管盖没有盖好造成PCR反应液热蒸发，影响反应温度的准确控制及反应也各成份的浓度，同时也成为一个污染源。不但会因压盖时由于粗心或者用力不均致使部分盖子变形，而且还会造成样品的交叉污染，所以我们推荐用独立管盖的8联管，每管盖一体，确保样本独立反应，避免交叉污染。

　　注：以上资料仅供参考!

2022-01-20 10:25:48 803 0

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