暗视野显微镜原理

　　暗视野显微镜又叫暗场显微镜，是一种通过观察样品受侧向光照射时所产生的散射光来分辨样品细节的特殊显微镜。暗视野显微镜和明场不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射击光线。因此，视场成为黑暗的背景，被检物体则呈现明亮的象。

　　1、丁达尔现象

　　光通过浑浊媒质(烟、雾、悬浮液和乳状液等)时，浑浊介质所呈现的光的强烈的散射现象。暗视野显微镜是以丁达尔效应为基础，即以胶体粒子的反射和散射现象为基础而设计的。

　　2、暗视野显微镜的工作原理

　　暗视野显微镜应用丁达尔现象，使用特殊的聚光器，照明光线不能直接入射到物镜之内，使入射光线经聚光器斜向照明被检样品，利用样品表面的散射光和反射光进行观察。暗视野显微镜视野内所看到的图像不是透过样品的直射光线形成的，而是由被检样品表面所散射和反射的光形成的，所以暗视野中看到的是被检样品的衍射光图像，非物体本身。暗视野照明法是斜射照明法的一种。

　　3、暗视野显微镜的优点

　　暗视野显微镜具有对微小物体的分辨能力，对大小在0.004μm以上的微小粒子，虽然看不清楚样品的细微结构，亦可清晰地分辨其存在和运动。

　　4、暗视野显微镜的缺点

　　由于暗视野显微镜是利用被检样品表面散射的光层而观察物体的，所以，在黑暗的视场中只能看到被检样品的存在与运动，但不能辩清样品内部的细微结构。

　　暗视野显微镜和一般的明视野显微镜区别在于二者的聚光器不同，暗视野显微镜装有一个ZY遮暗的聚光器，使光线不能通过聚光器，而只能从聚光器四周边及未遮暗的部位斜射到载玻片的标本上。因光线是斜射的，不能进入物镜，故观察的视野是暗的，而聚光器斜射到菌体上的光线，因光散射作用而使菌体发出亮光，反射到物镜内，这样在显微镜中可见到暗视野中明亮的物像。暗视野显微镜主要用于检查未染色标本的形态和运动能力。

　　暗视野显微镜常用来观察

　　暗视野显微镜的采用的暗场聚光镜。不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射投向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光而形成的明亮的图象。因此，在暗视野显微镜镜检时。只能观察到物体的存在，运动及外部形态，而很难分辨其内部结构。

　　暗视野显微镜镜检，可使用研究用暗视野显微镜，或将普通光学显微镜上的聚光器取下，换上暗场聚光器。

　　暗视野显微镜的操作方法：

　　1、不论是使用干燥物镜还是油浸物镜，暗视野显微镜镜检时，都应在聚光器的上透镜上加一大滴香柏油。

　　2、将制作好的细菌悬滴标本片置于载物台上，上升聚光器至顶部使油与载玻片接触。

　　3、放大光源。

　　4、进行聚光器光轴调节及调焦。用10×物镜找到被检物像，关小聚光器虹彩光圈至可在视野中看到视场光阑的轮廓，再上下缓慢调整聚光器，这样会使视场光阑的像变得清晰，如视场光阑不在场ZY，利用聚光器外侧的两个调节钮进行调整，当亮光点调到场ZY后，再将其开大，即可进行观察。

　　暗视场聚光器的使用：

　　1、暗视场聚光器安装：从聚光器座架上卸下明视场聚光器，然后将暗视场聚光器安装到位并固紧。

　　2、将被检样品的玻片标本置于载物台上，需用油浸的暗视场聚光器，要在聚光器上透镜与载玻片之间滴加香柏油，使之密接。

　　3、聚光器合轴调中：用低倍物镜对样品聚焦，随之用聚光器升降螺旋上下调节聚光器位置，当在暗视场中清晰地窥见一光环或圆形光点时，停止升降聚光器，用聚光器调中螺杆移动聚光器，使光环或光点调至视场ZX位置。

　　4、调节聚光器焦点：转动聚光器升降螺旋，使视场中的光环调成一Z小的圆形光点。此刻聚光器的焦点恰好位于样品处。

　　5、更换需用的高倍物镜进行暗视野显微镜镜检观察。

　　暗视场光挡的制作方法：

　　1、转动聚光器升降螺旋，使聚光器达到Zgao位置。

　　2、用低倍物镜对样品聚焦。

　　3、

　　暗视野显微镜是光学显微镜的一种，也叫超显微镜。暗视野显微镜的聚光镜ZY有挡光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。

　　1、有足够的照明，标本不可见

　　暗视野显微镜灯电压可以被设置得太低，或灯泡可能没有足够的强度照射试样。将电压升高到大约12伏或更换光源。如果不解决这个问题，检查暗视野显微镜的聚光器，以确保它正确的位置用适当大小的视场光阑。此外，还要检查颜色和中性密度滤光片，偏光板，相位差板，或其他可能会降低光照强度的光路。

　　2、视场的ZX降低光照强度，有一个暗点

　　可能是暗视野显微镜台下聚光器位置不正确或暗视野显微镜的物镜是错误的大小。将暗视野显微镜物镜向上和向下，同时在视场中观察试样。检查做出一定的物镜孔径和视场光阑设置敞开位置。如果这并不影响照明，改变视场光阑尺寸使其稍大或稍小，然后重新检查照明。

　　偶尔出现此问题可能是，使用过厚(大于标准一毫米)载玻片。如果载玻片太厚，要么改变到正确厚度的载玻片或检查物镜，以确定它是否可以调整，以补偿不同厚度的载玻片。

　　3、灯泡内部有涂层的黑色蒸发的钨烧结

　　在过高的电压长时间工作，这肯定会影响其寿命的灯泡已使用。更换暗视野显微镜灯泡，在灯电压降低后观察试样的显微摄影。

　　4、图像具有明视野周边带

　　这由于暗视野显微镜台下聚光器错误地居中或视场光阑太小了。恢复到明视场，并重新建立科勒照明条件，再重复暗场的过程，确保聚光器的ZX。如果这没有作用，则增加视场光阑的大小，直到适当的暗场条件成立。

　　当暗视野显微镜的暗场聚光镜具有太高的数值孔径，也可能出现这个问题。如果是在目标内部的可变光阑，降低光圈孔径的大小，以确定是否太多的斜光进入物镜镜头前面。此外，它可能有助于增加视场光阑的大小。

　　5、外围视场只有一侧是光明的

　　检查物镜转换器，以确保物镜正确地定位在暗视野