液相色谱仪紫外检测器,是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器,其工作原理是Lambert-Beer定律,即当一束单色光透过流动池时,若流动相不吸收光,则吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。
液相色谱仪紫外检测器是应用Z广泛的一种检测器,当检测波长范围包括可见光时,又称为紫外-可见光检测器。紫外检测器不仅灵敏度高、噪音低、线性范围宽、有较好的选择性,而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感,因此可用于对光吸收小、消光系数低的物质进行微量分析。既可用于等度洗脱,也可用于梯度洗脱。由于紫外检测器对流速和温度均不敏感,又可用于制备液相色谱仪。
在使用液相色谱仪紫外检测器时,要注意流动相中各种溶剂的紫外吸收截止波长,如果溶剂中含有吸光杂质,则会提高背景噪音,降低灵敏度。大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外或可见光吸收基团,因而有较强的紫外或可见光吸收能力,因此UVD既有较高的灵敏度,也有很广泛的应用范围,是液相色谱中应用Z广泛的检测器。
当一束单色光透过流动池时,若流动相不吸收光,则吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。其依据是光吸收定律,从光源发出的光经狭缝、滤光片、样品池到光电培增管上,使束由于样品浓度不同所引起光强的变化转换成光电流的变化,此光电流经放大器输入到对数转换器,使透光率T转成A输出。测出了A,就知样品浓度C。若从放大器直接输入记录仪,绘出的是样品透光率T变化的图谱,若从对数转换器输入到记录仪绘出的是样品光密度A变化的图谱。
液相色谱仪紫外检测器分为固定波长检测器、可变波长检测器和光电二极管阵列检测器。按光路系统来分,紫外检测器可分为单光路和双光路两种。可变波长检测器又可分单波长(单通道)检测器和双波长(双通道)检测器。PDAD是80年代出现的一种光学多通道检测器,它可以对每个洗脱组分进行光谱扫描,经计算机处理后,得到光谱和色谱结合的三维图谱。其中吸收光谱用于定性(确证是否是单一纯物质),色谱用于定量。常用于液相色谱仪对复杂样品(如生物样品、中草药)的定性定量分析。
液相色谱仪在使用紫外检测器分析检测时需注意以下事项,以保证检测器的灵敏度:
1、氘灯的光强受温度和电压影响较大,建议在恒温室内工作或者在冰库里工作;
2、T调零生产时机内已校准,当更换光电培增管后,需重新校准;
3、氘灯寿命可达数千小时,若发现记录仪不能调到10mV,且基线一直往小的方向漂移要考虑换灯。如氘灯不亮可再按一次电源开关,氘灯就会即亮,光电培增管寿命在数千小时以上。
荧光检测器:
主要用途:根据化合物具有荧光性质进行分析的,选择性高,只对荧光物质有响应。
特点:灵敏度也高,适合于多环芳烃及各种荧光物质的痕量分析。也可用于检测不发荧光但经化学反应后(一般进行衍生反应)可发荧光的物质。
缺点:不是所有化合物都具有荧光。
紫外检测器:
主要用途:基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器。
特点:①大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外或可见光吸收基团;②因而有较强的紫外或可见光吸收能力,因此既有较高的灵敏度;③广泛的应用范围,是液相色谱中应用Z广泛的检测器。
缺点:液相色谱仪该类检测器选择性较低,对于基质复杂的样品,在色谱定性和定量上会出现不准确。
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