液相色谱仪利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。
色谱法的分离原理是:溶于流动相中的各组分经过固定相时,由于与固定相发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。
色谱法Z早是由俄国植物学家茨维特在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的,色谱法因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱仪开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为经典液相色谱仪,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。GX液相色谱仪是在经典液相色谱仪的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱仪的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱仪。又因分析速度快而称为高速液相色谱仪,也称现代液相色谱仪。
1、高压:液相色谱仪以液体为流动相(称为载液),液体流经色谱柱,受到阻力较大,为了迅速地通过色谱柱,必须对载液施加高压。一般可达150~350×10^5Pa。
2、高速:流动相在柱内的流速较经典色谱快得多,一般可达1~10ml/min。GX液相色谱仪所需的分析时间较之经典液相色谱仪少得多,一般少于1h。
3、GX:近来液相色谱仪研究出许多新型固定相,使分离效率大大提高。
4、高灵敏度:GX液相色谱仪已广泛采用高灵敏度的检测器,进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10^-11g。另外,用样量小,一般几个微升。
5、适应范围宽:液相色谱仪,只要求试样能制成溶液,而不需要气化,因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于400以上)的有机物(这些物质几乎占有机物总数的75%~80%)原则上都可应用GX液相色谱仪来进行分离、分析。
近年来液相色谱仪分析技术得到快速发展,那么在采购液相色谱仪时如何看待性能技术指标的适用性?主要有如下几点:
1、首先要看液相色谱仪的灵敏度或检测限是是否能满足使用要求。如果样品稀少,则必须首先考虑液相色谱仪的灵敏度,如果灵敏度达不到使用要求,就是极大的不适用。
2、液相色谱仪的噪声是否满足使用要求。噪声是液相色谱仪主要分析误差来源,仪器有多大的N,它都直接累加在分析结果中,所以有多大噪声,分析数据中增加多大误差。
3、量程能否满足使用要求。目前,国内外有些液相色谱仪的UVD,因为噪声太大,所以其里面量程只能到0.1~2.0AUFS,而当今世界上的液相色谱仪的量程可达到0.005~2.UFS。尤其是在生命科学研究领域,对液相色谱仪的量程要求越宽越好。
4、液相色谱仪的线性动态范围是否满足使用要求。它决定了使用者能否保证使用在仪器的线性范围内。所以,液相色谱仪的线性动态范围越大越好。
5、液相色谱仪高压泵的压力、流量范围是否能满足使用要求、能否做梯度分析。这方面需要看使用者的具体要求:如果是要求制备、收集样品,就必须选择大流量的高压泵;如果是做生命科学研究,往往要求高压泵的流量连续可调,甚至要求量程下限要达到0.001ml/min;如果做较复杂的样品分析,就必须要有梯度功能。
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