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培养的细胞在通常条件下需要有一定的密度才可以生长良好,因此需要要进行细胞计数。以每毫升细胞数来表示计数结果。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。
在细胞群体中,一些细胞常常因为各种因素而死亡,细胞活力是指活细胞占总细胞数的百分比,为了了解在细胞分离的过程细胞是否有损伤,所以通常需要对组织中分离的细胞进行活力检查。为了了解细胞冻存和复苏的效果,对复苏后的细胞也要进行活力检查。
用台盼蓝对细胞进行染色,死细胞着色,活细胞不着色,以便可以辨别出死细胞与活细胞。也可以通过细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应,来测定细胞相对数和相对活力。
活细胞计数法
活细胞计数常用的方法有平板菌落计数法,平板菌落计数法是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液,作一系列的倍比稀释,然后将定量的稀释液进行平板培养,通过培养出的菌落数,能够计算出培养物中的活菌数。这种方法灵敏度相当高,这种方法可以检测污染活菌数,现在国际上众多国家都采用这种方法。
平板菌落计数法有以下三点注意事项:
①选取进行计数的平板的菌落数通常在30~300之间,过多或过少结果都不准确;
②菌落可能蔓延,影响计数,Z好在培养基中加入0.001%2,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC);
③此方法只用于形成菌落的微生物。
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