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1976年德国马普生物物理研究所Neher和Sakmann创建了膜片钳技术(patch clamp recording technique)。这是一种以记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜单一的或多个的离子通道分子活动的技术。它和基因克隆技术(gene cloning)并架齐驱,给生命科学研究带来了巨大的前进动力。
发展状况:
1.记录方式发生了很大变化
不仅有传统的单通道记录方式与一般的全细胞几路方式,还陆陆续续发展了松散封接记录方式、膜穿孔记录方式、巨膜片记录方式等等。
2.不断出现的应用技术
发展了微电极内灌注技术以便能够从电极内施加药物和更换电极内液。在研究细胞间的缝隙连接通道事,发展了双膜片记录法。膜片探针技术指的是通过把富含神经递质受体的游离膜片靠近突触部位,能够检测突触活动以及递质释放。膜片填塞技术是指如果把特异的膜片探针插入卵母细胞,能够检测细胞里第二信使的含量。发展了膜电容测定法,为了方便研究细胞的胞吞和胞吐机制。
3.有很多能够使用的标本种类
有各种各样的标本可以提供使用,从Z早的内分泌细胞、肌细胞(心肌、平滑肌、骨骼肌)和神经元发展到胃壁细胞、上皮细胞、血细胞、肝细胞免疫细胞、精母细胞、耳窝毛细胞、内皮细胞等多种细胞;从培养细胞(包括细胞株)以及急性分散细胞发展到组织片(如脑片、脊髓片)乃至整体动物;从青蛙、蝾螈、爪蟾卵母、蜗牛细胞发展到鸡细胞、人细胞、大鼠细胞等等;从动物细胞发展到真菌、植物以及细胞细菌。除此以外膜片钳技术在平面双分子层(Planar bilayer)、脂质体(Liposome)等人工标本上也得到了广泛的应用。
4.研究的对象不再只是离子通道
如今,不仅可以对离子通道(配体门控性、电压门控性、第二信使介导的离子通道、机械敏感性离子通道和缝隙连接通道等等)进行研究,而且可以可以对离子泵、交换体和可兴奋细胞的胞吞以及胞吐机制进行研究。
5.膜电极不仅仅是传统意义上的电信号记录电极
它还能成为其他研究方法的工具,例如它作为进行单细胞PCR技术时的细胞内容物抽吸工具被使用。
6.越来越广泛的应用范围
膜片钳技术已经运用在如分子生物学、药理学、免疫学等等生物领域的很多学科里。变成生物学研究的主要技术手段之一。膜片钳的主要发展趋势是和其他生物学技术结合应用。
7.全自动膜片钳技术的应用
全自动膜片钳技术不但通量高,一次性可以记录几十个甚至几百个细胞,并且记录的质量均一,一致。实现了自动化找细胞、形成封接。破膜等等,避免了复杂的操作,节省了精力和时间。
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