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聚合酶链式反应,简称PCR。聚合酶链式反应,其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,通过高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应形成一个周期,目的DNA迅速扩增,其具有节约时间,操作简单,高灵敏度,强特异性等特点。其又被叫做无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。其不但在核酸序列分析和基因分离、克隆被使用,其还在任何有DNA,RNA的地方被使用或者被用来对疾病进行诊断。
普通PCR仪操作规程
开机操作
(1)将PCR仪电源开关打开。
(2)将PCR仪顶盖向后平推,然后将PCR薄壁管放进去。
(3)将PCR仪顶盖向前平推,并且均匀用力压下反扣部分。
值得注意的是:9700PCR仪必须使用圆头的PCR薄壁管。
关机操作
(1)实验结束后,点击EXit到主界面出现,将PCR电源开关关闭。
(2)均匀用力抬起反扣部分,将PCR仪顶盖向后平推,将PCR薄壁管取出。
(3)将PCR仪顶盖向前平推。
荧光定量PCR仪操作规程
1.开始运行仪器
将PCR仪底座开关打开,再将定量PCR仪检测器开关打开。在实验之前,首先对系统预热半个小时,打开电脑,将iQ5软件启动。
2.放置样品
在0.2ml的薄壁管或96孔板内加入PCR反应体系,将管盖盖上,注意,不要让手指和反应管表面有接触,所以必须将一次性塑料手套戴上。按照顺序在仪器的加热孔中放入反应管。
3.设置程序,运行试验
定量PCR软件的基本操作步骤如下:
(1)对热循环程序文件进行设置。
(2)对反应管文件进行设置。
(3)点击“run”键,将程序运行。
(4)数据分析
4.结果分析
(1)PCR反应结束后,标准曲线和Ct值软件会自动计算。
(2)可以在软件窗口选择相应的分析功能进行表达量分析,等位基因分析。
(3)点击右上方的“Report”键,还能够将结果报告单输出。
5.关闭运行仪器
实验结束后将iQ5软件、荧光定量检测器及扩增系统电源关闭,将电脑关闭,将反应管取出。
06-19
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