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琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
琼脂糖凝胶电泳步骤
1.缓冲液的制备
(1)TAE或者TBE为常用的缓冲液,PH值在6-9之间。
(2)不管是TAE或者TBE均含有EDTA,其能够将二价金属离子去除。
2.琼脂糖胶板的制备
(1)在三角瓶中放入一定量的琼脂糖,将电泳缓冲液加入其中,使一定浓度的琼脂糖溶液(PCR产物:1.2%;基因组DNA:0.8%)配制完成。
(2)在制胶架上插上选好的梳子,在制胶架中放入选好的凝胶盘。
(3)将溶液加热煮沸澄清,冷却到60摄氏度将10毫克/毫升EB加入其中,摇匀后往制胶架中倒入。
(4)放置在室温环境中30-40min等到凝胶聚合后,将梳子轻轻拔掉(注意:先拔一侧,不然垂直拔除产生真空造成部分凝胶带出)。
3.将电泳缓冲液加入到两边的槽中,使得凝胶被全部浸没,液面应该比胶面高1毫米。
4.在梳井内加样,注意预防气泡被引入。
5.将上盖盖好,将电泳仪接通。
6.电压需要按照实际情况来选择比较合适的。长胶需要比较高的电压,然而高电压会缩短电泳的时间,发热高,分辨率低,其对于样品的筛选或者样品纯度的检查很适合。相反,电压低,发热少,分辨率比较高,然而耗费时间长。
7.在完成电泳实验后,应当首先将电泳仪关闭,然后将电源线拔除,再将电泳槽上盖打开,将凝胶托盘取出来。
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