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在自发或人工诱导下,两个细胞或原生质体融合,使得一个杂种细胞形成,即是细胞融合(cell fusion)。
仙台病毒法
我们了解,凝集细胞的能力为很多病毒所具有。其一边在一个细胞表面黏接,另外一边在另一个细胞表面黏接,从而在病毒的作用,两个细胞靠近发生凝结。
仙台病毒又叫做日本血凝病毒HVJ,如果细胞被感染,那么会有某些改变在其表面发生,,使得这些细胞的融合非常容易发生,甚至死的HVJ病毒也会对细胞融合产生促进的作用。
日本学者冈田使两种不同的动物细胞在仙台病毒的作用下发生凝集,Z终融合。
根据研究可知:病毒的膜是主要的对细胞融合起到促进作用的有效部位,然而,使用超声波将病毒膜打碎,对细胞融合促进的功能其依然存在。
病毒内核酸的活性与仙台病毒促使细胞融合无关,病毒被膜上的磷脂成分和仙台病毒促使细胞融合相关。
仙台病毒被膜糖蛋白与其促融合的能力有关。在动物细胞融合中,仙台病毒(HVJ)已成为产生细胞杂种的标准融合剂。
病毒促使细胞融合的主要步骤:
在病毒黏结作用下,两个原生质体或细胞彼此靠近。
两个细胞膜间互相渗透,胞质互相渗透是由于病毒与原生质体或细胞膜的作用。
两个原生质体的细胞核互相融合。
正常的细胞分裂途径被进入,含有两种染色体的杂种子细胞被分裂而成。
基因枪的注意事项
1、建议现用现配亚精胺,或者在零下20~℃冰箱中(时间不超过1个月)储存,如果保存时间过长或没有保存好,亚精胺会发生降解,从而会对DNA吸附于金属微粒表面的能力产生影响。
2、对于植物材料转化,受体材料决定了微粒zi弹载体的选择。除此以外,可裂圆片的规格必须对应微粒zi弹载体。
3、建议在枪击前将质粒DNA的储存浓度调至1ug/u1,如此对于微粒zi弹制备时的DNA取样非常的有利。建议以0.75~1Pg/mg(金粉)作为质粒DNA与金粉形成复合体的比例比较好。
4、对于转化率产生影响的重要参数有质粒DNA的纯度和浓度,0.75~1/1gDNA为通常每枪的量。
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