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基因合成是指在体外人工合成双链DNA分子的技术,与寡核苷酸合成有所不同:寡核苷酸是单链的,所能合成的Z长片段仅为100nt左右,而基因合成则为双链DNA分子合成,所能合成的长度范围50bp-12 kb。
概念
根据人们的愿望,严格的进行设计,利用体外DNA重组和转基因技术,将新的遗传特性赋予生物,将与人们需要的更符合的新的生物类型和生物产品创造出来,即是基因工程,其又称为NA重组技术,其是在在DNA分子水平前提下设计和施工的。
原理
原理是基因重组,以下为基因重组的基本工具:
1、载体
常用载体
质粒是一种双链环状DNA分子,其具有自我复制能力,于细菌染色体独立存在,裸露,其具有简单的结构,是Z为常用的载体。
其它载体
动植物病毒以及噬菌体的衍生物也能够作为载体。
条件
具有供重组DNA的鉴定和选择的基因;具有供外源DNA片段插入的一至多个限制酶切点;可以复制并稳定保存在受体细胞中。
2、限制性核酸内切酶
来源
其主要由原核生物中分离纯化出来。
功能
其可以将双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列识别出来,并且断开每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,所以专一性为其所具备。
结果
经限制酶切割产生的DNA片段末端一般有黏性末端和平末端两种形式。
3、DNA连接酶
种类
DNA连接酶有两种,分别为T4DNA连接酶和E.coliDNA连接酶。
不同点
T4噬菌体为T4DNA连接酶的来源,大肠杆菌为E.coliDNA连接酶的来源,T4DNA连接酶可以将两种末端均缝合起来,然而连接平末端具有比较低的效率。E.coliDNA连接酶仅仅可以连接双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键。
相同点
均能将磷酸二酯键连接。
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