- 为您推荐:
微弹技术是使用基因枪往表皮细胞中导入裹着DNA疫苗的直径为1μm左右的金粒,这项技术正在快速的发展且具有广泛的应用前景。基因枪功能分类高压瞬时放电式和气动加速式...[查看全部]
基因枪法又称为微弹技术或者粒子轰击细胞法。
定义
1987年,使用该技术在钨粒表面附着MV(烟草花叶病毒)RNA,对洋葱表皮细胞进行轰击。通过检测发现,能够复制病毒RNA,并且使用该技术往洋葱表皮细胞中导入CAT基因由Vlein首先报道。如今,在番木瓜、甜橙、葡萄、、棉花、大豆、菜豆、小麦、黑麦草、甘蔗、烟草、水稻上应用该技术获得成功。
原理
基因枪技术又叫做微粒轰击技术或者生物弹道技术,是通过高压气体加速或者huo药爆炸直接往完整的组织或者细胞中送入包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒的一种技术。其为基因转移技术中的一种方法。
对微粒加速装置进行使用,从而使得裹着外源基因的微米级的金或钨(它们比重大, 而且化学性质都很稳定)颗粒获得足够的动量,往靶细胞或组织打入,是该技术的基本原理。
作用
通过压缩气体(氦或氮等) 动力使一种冷的气体冲击波产生,进入到轰击室(所以使细胞因为“热”气体冲击波导致损伤的情况得以避免),向着细胞打入粘有DNA 的细微金粉,将细胞壁、细胞膜、细胞质等穿过到达细胞核,使基因转移完成,此即是基因枪的作用。
大多数细胞会由于没有合适的力道而遭受失败,仅会有很少的细胞达到要求,然而基因转移操作这很少的细胞就可以完成。有较大的密度,容易穿孔;有较小的口活性,对细胞有较小的危害是利用氦气、金粉的主要原因。
... 查看全文基因枪技术又叫做微粒轰击技术或者生物弹道技术,是通过高压气体加速或者huo药爆炸直接往完整的组织或者细胞中送入包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒的一种技术。
特点
1、虚拟化
在虚拟现实系统中,使用PC机的软件就可以完成数据的分析和显示,测量仪器可以由PC机与额外提供的一定的数据采集硬件组合而成。此种以PC机为基础组件的测量仪器,叫做虚拟仪器VI(VirtualInstrument)。在虚拟仪器中,功能完全不同的测量仪器可以通过使用同一个硬件系统,应用不同的软件编程来获得。可升级性、可扩展性、可视性、通俗性以及通用性为基因导入仪核心的软件系统的基本特性,代表了仪器发展的趋势。
2、网络化
双向通信功能对于通常的智能仪器仪表来说已经都具备了,然而,和真正意义上的网络通信相比,此种双向通信功能依然有较为明显的差距。随着网络技术的飞速发展,由于互联网技术,基因导入仪不仅实现了智能化,而且网络化也得以实现,使得现场测控参量就近登入网络,并且必要的信息处理功能也具备了。
3、更加智能
现代检测与控制系统的发展越来越智能化。将会有一定的人工智能包含于基因导入仪的进一步发展中,如此,检测或控制功能就能够不需要人工干涉,而自主地被完成。
4、体积微小
综合应用微机械技术、微电子技术、和信息技术等,使得仪器具有较小的体积和较全面的功能,且更智能。在YL、生物技术、军事、航天、以及自动化技术领域,其和其它仪器的接口、对信号输出、放大的控制,对信号的采集、处理的完成等功能的作用非常的独特。
5、功能多样
基因导入仪的特点之一,即是功能多样齐全。如具有任意波形发生器、频率合成器以及脉冲发生器等功能的函数发生器,和专用脉冲发生器和频率合成器相比,除了拥有更加高的性能,而且还有较好的解决方案在各种测试功能上提供。
相关研究
1、DNA疫苗的研究与应用
2、基因ZL相关的研究
3、基因转殖植物的研究
4、基因工程或药物相关研究
5、基因
... 查看全文微弹技术是使用基因枪往表皮细胞中导入裹着DNA疫苗的直径为1μm左右的金粒,这项技术正在快速的发展且具有广泛的应用前景。
基因枪功能分类
高压瞬时放电式和气动加速式为目前为止能够用于在体操作的两类基因枪。
因为高压放电要用高压(17kV),使用在人身上不合适。
气动加速式
“直吹”为气动加速式主要方式。在直径为4mm的尼龙管的内壁均匀地吸附裹着DNA的金粒,高压气体通过尼龙管时吹走金粒并进行加速。不仅需要专用设备在尼龙管的内使金粒均匀地吸附,而且有着相对比较复杂的制备过程。
高压瞬时放电式
该方法能够对气动加速式的不足之处进行克服。仅仅需要在在筛状载物上均匀地分散吸附裹着DNA的金粒。工作时,引射器的负压吸进裹着DNA的金粒,进入加速通道加速,足够的速度为微弹所获得之后对靶细胞进行射击,有着简便的操作和良好的效果。
基因枪法操作
在供体DNA中浸泡直径4um的钨粉或金粉,然后使用基因枪往细胞、组织或器官中打入这些粒子,然而具有比较低的转化效率。除此之外,基因ZL和抗体制备也使用这种方法,初步的效果已经获得。
应用
基因ZL
细胞疾病或病症的ZL利用外源基因导入,足够量的转基因表达通过能够产生细胞特异性的非免疫原性载体来提供,从而使所需效果产生。
转基因动植物新品种培育
转基因生物新品种的培育是外源基因导入应用Z广泛的领域。例如转基因植物,2016年,范围内已经有达到1.9亿公顷的转基因栽培面积。
... 查看全文基因工程技术是基于分子生物学等发展学科,使对生物遗传物质新组合进行构造的能力为人类所获取,基因枪为基因工程技术(亦称重组DNA 技术)的一个重要组成部分,其实际上是以在体(in vivo)或离体(in vitro)的方式往靶细胞核内导入外源基因的技术。
基因枪分类
此方法是基因枪为外源基因的导入提供帮助。按照动力系统,基因枪包括huo药引爆、高压放电和压缩气体驱动三类。
基因枪的基本原理
基因枪的基本原理是DNA利用动力系统吸附于带有基因的金属颗粒(金粒或钨粒)表面,通过一定的速度往细胞中射入,因为小颗粒具有很强的穿透力,所以无须将细胞壁和细胞膜除去,从而使得稳定转化的目的实现。
基因枪功能
1、对裹着目的基因的微粒(通常用金粒,简称微弹)进行加速,使其的速度足够,对靶细胞进行射击,往细胞中导入基因。
2、均匀散开微弹,在较大区域内分散,细胞击中的较多,使转染率获得的较高。
应用
基因ZL
细胞疾病或病症的ZL利用外源基因导入,足够量的转基因表达通过能够产生细胞特异性的非免疫原性载体来提供,从而使所需效果产生。
转基因动植物新品种培育
转基因生物新品种的培育是外源基因导入应用Z广泛的领域。例如转基因植物,2016年,范围内已经有达到1.9亿公顷的转基因栽培面积。
... 查看全文基因工程技术是基于分子生物学等发展学科,使对生物遗传物质新组合进行构造的能力为人类所获取,基因枪为基因工程技术(亦称重组DNA 技术)的一个重要组成部分,其实际上是以在体(in vivo)或离体(in vitro)的方式往靶细胞核内导入外源基因的技术。
优势
在棉花转基因技术中,农杆菌介导法有着非常广泛的应用。在国际上,农杆菌介导法变得越来越普遍,而且进展相当大。20多个棉花品种的GX、稳定的规模化转化体系为ZG农科院棉花研究所成功建立,使流水线操作得以实现,使GX、工厂化的棉花转基因技术体系建立了。
虽然无论理论还是实践,农杆菌介导法均是比较完善的一种转化技术,并且对于双子叶植物的转化已经得到广泛地应用,然而宿主基因型范围限制了该方法。此方法具有非常烦琐复杂的转化程序,难以进行很多优良品种的转化。
基因型、种属虽然不会对花粉管通道转化法进行限制,然而其没有较为完善的转化技术,所以,行之有效的基因转化技术需要被发展出来。
在2013年,一种棉花的基因枪活体快速转化方法由ZG农业科学院棉花研究所叶武威等人开发出来,利用第三代便携式基因枪和优化转化的参数使活体转化时对花蕾和花粉形成微创伤,从而将获得转基因植株的周期大大的缩短。
以下为该方法的操作步骤:
1、通过基因枪轰击的方法,往父本棉花的花粉中轰入含有外源基因的载体。
2、往活体母本棉花中授基因枪轰击后的父本花粉。
3、转基因棉花种子即是授粉后的母本棉花所结的种子,使棉花的基因转化得以实现。
组织培养步骤在该方法中没有必要,基因转化直接在活体棉花上就可以实现,操作简单,使用,对组织培养不依赖,有较好的稳定性。
用途
基因导入仪除了在各种微生物以及动物、植物细胞的电穿孔方面应用广泛,也能够用来研究基因导入和细胞杂交、融合。
操作直观、简单,对电容、电阻的设定范围进行了细化。在相关条件下使细胞的电穿孔实验具备更加宽广的选择。当如人类和小鼠等真核细胞导入基
... 查看全文基因枪技术又叫做微粒轰击技术或者生物弹道技术,是通过高压气体加速或者huo药爆炸直接往完整的组织或者细胞中送入包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒的一种技术。
基因枪历史
1987年,美国康奈尔大学Sanford与该校工程技术专家Wolf及Kallen合作研究出一种基因转移的新方法,即是Z早的基因枪。台式基因枪为di一代基因枪,基因枪中Z原始的类型是huo药型台式基因枪。洋葱表皮细胞的转化由Klein等人Z早应用基因枪实现。
1988年,三个关于基因枪技术的ZL先后由美国康乃尔大学申报。
1987-1990年,相继出现了高压放电、压缩气体驱动等各种基因枪。
1988年,McCabe在钨粉上包裹目的基因,对大豆茎尖分生组织进行电轰击,结果外源基因在子代中被检测到了。
1989年,成功使用气动式基因枪完成烟草等植物的转化。
1989年,Kartha等人用大麦的细胞和组织进行培养,使得报告基因的瞬时表达成功被检测到。
1990年,商品基因枪PDS-1000系统由美国杜邦公司(DuPont Company)推出。
1992年,PDS-1000/He枪由伯乐公司推出。
1989年和1991年,新的枪种分别由国内ZG科学院生物物理所和清华大学推出。
... 查看全文在自发或人工诱导下,两个细胞或原生质体融合,使得一个杂种细胞形成,即是细胞融合(cell fusion)。细胞融合使得异核体(heterokaryon)形成、通过细胞有丝分裂异核体进行核融合、Z终使得单核的杂种细胞形成为细胞融合的基本过程。作为一种实验方法,在单克隆抗体的制备,膜蛋白的研究方面,细胞融合应用非常广泛。
细胞融合的影响因素
一、影响动物细胞融合的因素
在动物细胞的融合过程中,细胞融合率不仅会受到促融剂的影响,而且离子强度、离子种类、温度、PH、细胞性质等均会对细胞融合率产生影响。
1、细胞融合时,温度和运动状态需要适宜。
2、细胞融合过程中,一般会消耗大量的氧气,缺氧时不融合。
3、某些细胞融合时需要Ca2+,不然不融合。
4、PH为7.4-7.8为Z合适的酸碱度,不在该范围内,不适合融合。
5、亲本细胞表面性质对细胞融合率有比较大的影响,如果表面光滑,那么融合比较难,如果表面覆盖绒毛而不规则,那么融合比较容易。
6、不同的细胞种类,融合效果也会有所差异。例如淋巴细胞、血细胞几乎不融合,腹水癌融合比较容易。
二、影响植物细胞融合的因素
植物原生质体融合不存在种属特异性,和其自身种属不相关联,因此,只有外界条件影响融合效率。
1、将少量CaCI2加入到融合液中,会对电导率起到一定的维持作用,从而保护细胞。除此之外融合率会受到电脉冲大小、处理时间长短、以及交变电流的强弱的影响。
2、在融合前,将原生质用混合盐溶液进行处理,和将伴刀豆蛋白、二甲基亚砜等添加进促融剂中,能够使得融合率提高。
3、当电场诱导融合时,原生质体密度会对融合率产生影响。2-8×104个/ml为Z适宜的密度,如果密度大于106个/ml,那么会融合成团;如果密度小于104个/ml,那么会得到较低的融合效率。
4、作用时间在PEG诱导融合中起到关键性作用,特别重要的是高Ca2+和PH溶液处理时间长短。如果时间过短,那么不融合;如
... 查看全文