子实经验:怎么样选择合适的Western blot封闭液？

在做Westernblot实验中，会用到固相载体(如NC膜，PVDF膜)，在这些固相载体表面有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的很多洞洞里面，但是蛋白并不是连续的，而有很多空隙，抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异性的信号。

常见的封闭液1.BSA

BSA是Z常用的封闭液，成分单一适用于大多数情况。若免疫原是偶联BSA的，BSA有很强的免疫原性，会导致产生很多针对BSA的抗体，为避免交叉反应，不能用BSA，脱脂奶粉封闭，可以选用酪蛋白或无蛋白的封闭液。

常见的封闭液2.血清

封闭血清的原理主要有两点，diyi是待测样本有些与蛋白非特异性结合的物质，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分分特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。第二待测样品中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间的结合，BSA无法封闭Fc受体。

常见的封闭液3.脱脂奶粉

脱脂奶粉Zda的优点是价格便宜，但由于成分相对复杂，所以适用范围要狭窄一些。磷酸化抗体也许会导致背景增加，此外，因为自身含有生物素，不能用于生物素标记的抗体系统。脱脂奶粉种含有少量的生物素和碱性磷酸酶残留，在使用生物素-亲和素系统和碱性磷酸酶标记的二抗时，也会使得高背景或本底水平。

MPC-5小鼠足细胞

M619人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞

MUM-2C人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞

M109小鼠肺癌细胞

MU89人黑色素细胞

NCTC2544人角质细胞

KBM5人慢性髓细胞性白血病细胞

NRK-49F大鼠肾成纤微细胞

NP69人鼻咽上皮细胞

NCTC2472小鼠纤维肉瘤细胞

NB2-11大鼠淋巴瘤细胞

NB4人急性早幼粒白血病细胞

NIE-115小鼠神经母细胞瘤

N9小鼠小胶质细胞

NCM460人正常结肠上皮细胞

NS20Y小鼠神经母细胞瘤

NIT-1小鼠胰岛瘤细胞

NPA人甲状腺癌细胞

ND7/23大鼠背根神经节神经母细胞瘤

OAW42人卵巢癌细胞

OCI-LY10人B淋巴瘤细胞

OSC-19人舌磷癌细胞

OCM-1人脉络膜黑素瘤细胞

PG-4猫胶质细胞

PAM212小鼠角质细胞

PMVEC大鼠肺血管内皮细胞

QBC939人胆管癌细胞

QGY7703人肝癌细胞

RLE-6TN大鼠肺上皮细胞

RAOEC大鼠主动脉血管内皮细胞

RA大鼠星型胶质细胞

rmc-1小鼠视网膜Müller胶质细胞

RT112人膀胱移形癌细胞

RASMC大鼠主动脉平滑肌细胞

RM大鼠小胶质细胞

RC-4B/C大鼠垂体瘤细胞

ROS1728大鼠成骨样细胞

SUVECS猪静脉内皮细胞

ST2小鼠间质细胞

SCL-1人皮肤磷癌细胞

SUN-16人低分化胃癌细胞

SJSA-1人骨肉瘤细胞

STC-1小鼠肠内分泌细胞

本公司由海外华侨和多名海归博士组成的技术团队，在基础科研领域，我们致力于推出更多更新的工具细胞和通路细胞，让细胞生物学研究更简便、GX；在生命健康领域，我们致力于各种PDX肿瘤模型动物和转基因动物的研发，致力于CAR-T细胞ZL技术与CAS9基因编辑技术的结合应用，为人类在Z终战胜肿瘤的征途提供一份热量和期许。

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