酶联免疫吸附试验（ELlSA）诊断禽流感

酶联免疫吸附试验技术（enzymeinmmnosorbentassay，ELISA），以免疫过氧化物酶技术为基础，创立于1971年。它的基本原理是将抗原或抗体吸附到固相载体的表面，并仍能保持其免疫活性；抗原或抗体与酶所形成的结合物各自保持其免疫学活性和酶的催化活性；结合物与相应的抗体或抗原反应后，免疫复合物上的酶在遇到相应的底物时，可催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色物质，可用肉眼观察。由于反应颜色的深浅与相应抗体或抗原的量成正比，故可对抗体或抗原进行定量测定。1974年Jennings等首先用ELISA对注射流感病毒所产生的抗体消长规律进行了检测，Lanbre认为ELlSA的敏感性远高于HI和补体结合反应。Meulemans（1987）对ELISA、AGP、HI检测AIV抗体进行了比较研究发现，AGP和ELISA一样均能检测型特异性抗原（抗体）,但其敏感性远低于ELISA，HI适用于亚型的检测，其敏感性也不如ELISA。

李海燕等用杆状病毒表达的AIV病毒核蛋白制备抗原，建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接（重组核蛋白）ELISA诊断技术（rNPELISA）。实验证明，rNP-ELISA与全病毒间接ELISA（AIV-ELISA），AGP及HI的符合率分别为99．9％、97．1％和98．8％，并能100％检出AGP阳性及疑似HI阳性的血清样品，这证明了rNP-ELISA是检测A型AIV血清特异性抗体的一种特异、敏感、微量、快捷和经济的血清学诊断技术。

1993年，Skodihall建立了快速诊断的DAS-ELISA，大大缩短了诊断时间，用混合纤维素酯膜或硝酸纤维素膜代替微量反应板，可保留ELlSA的特异性、敏感性，其结果又不需要特殊仪器分析，可肉眼判定。ELlSA法已成为AIV流行病学普查及早期快速诊的Z有效和Z实用的方法。

ELISA方法的敏感性和特异性与抗原的纯度直接相关，1984年Abraham等报道了抗原快速提纯法，所需时间与常规的抗原提纯法相比缩短10倍，ELISA成为Al流行病学普查及早期快速诊断的Z有效和Z实用的方法。

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