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试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称:
通用名:鸡白细胞介素-10(IL-10)酶联免疫分析试剂盒
使用目的:
本试剂盒用于测定鸡血清、血浆、或其它相关组织液中白细胞介素-10(IL-10)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡白细胞介素-10(IL-10)水平。用纯化的鸡白细胞介素-10(IL-10)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入鸡白细胞介素-10,再与HRP标记的羊抗鸡抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的鸡白细胞介素-10呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡白细胞介素-10(IL-10)含量。
试剂盒组成
120倍浓缩洗涤液30ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(90ng/L)0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
标本处理及要求
1.血清、血浆、脑脊液、腹腔液标本可直接测定;
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
3.采集后尽早进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在diyi、第二孔中分别加标准品100μl,然后在diyi、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后再各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后,在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉;再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为60ng/L,40ng/L,20ng/L,10ng/L,5ng/L)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间Z好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,Z好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔diyi的孔OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
检测范围:
4ng/L-80ng/L
规格:
96人份/盒
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
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- 2004-11-06 09:23:05
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