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- 【导读】一、测定原理强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量,测定范围为1~10mg...
- 一、测定原理强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量,测定范围为1~10mg蛋白质。二、吸光值测定按下表操作:试剂空白管测定管双蒸水0.2ml/待测液/0.2ml双缩脲试剂0.8ml0.8ml混匀,室温静止15min,于540nm比色,空白管调零三、标准曲线绘制用10mg/ml的BSA分别配制浓度为0、2、4、6、8、10mg/ml的标准BSA溶液,按下表操作:试管号123456标准BSA浓度(mg/ml)0246810标准BSA溶液双缩脲试剂0.2ml0.8ml混匀,室温静止15min,于540nm比色,以1号试管调零计算得标准曲线公式为:y=0.0411x(x为蛋白浓度,y为吸光值)四、结果计算将所测得的吸光值A540代入标准曲线公式即可计算出蛋白浓度,单位为mg/ml注意事项:1、样品蛋白浓度须在1~10mg/ml范围内,低于1mg/ml不能用此法,高于10mg/ml须做相应稀释2、该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰,待测样品中应不含这些物质订购热线021-54100800
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