蛋白酶YZ剂的选择 应用 使用 方法 说明 上海索宝生物科技有限公司 为你服务 罗氏蛋白酶YZ剂&磷酸酶YZ剂

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cOmplete是多种蛋白酶YZ剂的混合片剂：为水溶性片剂；同时持续YZ丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶及金属蛋白酶等在内的多种蛋白酶；可用于所有的组织及细胞，如动物、植物、酵母、细菌或真菌。

当细胞破碎的时候，蛋白水解酶就会被释放出来或被激活，使电泳结果复杂化，影响Z终结果分析。为了避免这些情况的出现，建议在样品制备时尽可能在低温下进行。此外，许多蛋白酶在pH9以上就失活了，因此Tris碱，碳酸钠或碱性载体两性电解质往往能YZ蛋白水解。

但是有些蛋白酶在上述条件下仍然保持着活性，此时应当使用蛋白酶YZ剂。因此对于我们想要研究的蛋白来说，选择性和有效的YZ这些蛋白酶对于蛋白纯化路线设计来说显得尤为重要。

蛋白酶YZ剂与蛋白酶一样，都是纷繁复杂的，通常使用许多化学物质作为蛋白酶YZ剂，如PMSF和leupeptin。而且由于一种蛋白酶YZ剂只对某一类蛋白酶起作用，因此通常建议复合使用蛋白酶YZ剂，如广谱蛋白酶YZ剂“鸡尾酒”，见下表（来自《蛋白质电泳实验技术》）。

其实重要的是这种片剂操作方便：只要将一片completeTM加进缓冲液，便可YZ多种不同的蛋白酶，有效地保护目的蛋白，效果明显，免除了称量个别YZ剂的麻烦。而且completeLysis1个Kit20次反应，定价为2167（CompleteLysis,bacterialII，其它类型价格差不多），高品质，价格也不高，一举两得，何乐而不为呢？

另外MERCK在YZ剂生产提供方面也实力雄厚，旗下的各有一千多种不同用途的YZ剂用于信号转导、细胞凋亡、蛋白质组、细胞分化、神经生物等诸多领域。其中也包含了分别适用于细菌、植物、酵母、哺乳动物细胞、重组蛋白、His融合蛋白等不同目的的蛋白酶YZ剂混合物，特异性YZ丝氨酸蛋白酶或半胱氨酸蛋白酶活性的YZ剂混合物、碱性磷酸酶YZ剂混合物、酸性及碱性蛋白酶YZ剂混合物等等。

比如用于广谱蛋白YZ的ProteaseInhibitorCocktailSetI是五种蛋白酶YZ的混合物，广泛YZ多种不同蛋白酶及酯酶的活力，以冻干粉形式提供（每管以1ml水重溶，即可得1ml的100储液），方便保存。其它有针对性的蛋白酶YZ剂还有ProteaseinhibitorcocktailsetII（细菌专用）、ProteaseinhibitorcocktailsetIII,EDTA-free（哺乳动物细胞和组织专用）、proteaseinhibitorcocktailsetIV（酵母及真菌专用）、ProteaseinhibitorcocktailsetV,EDTA-free（哺乳动物细胞和组织专用广谱丝氨酸、半胱氨酸蛋白酶YZ剂）、ProteaseinhibitorcocktailsetVI（植物专用）和ProteaseinhibitorcocktailsetVII（His融合蛋白纯化专用）。种类繁多，合适于有不同要求的实验人员。

除此之外，GBiosciences的ProteCEASEProteaseInhibitorCocktails包含了各种经过浓度优化后的蛋白酶YZ剂，具有良好的YZ广泛物种蛋白纯化中的蛋白酶活性的作用。ProteCEASE已经发展成为大规模制备型，具有50ml和100ml的裂解缓冲液中使用的两种规格。ProteCEASE分含有EDTA型，用于YZ金属蛋白酶（metalloprotease）；和不含有EDTA型，用于维持依赖于二价阳离子的蛋白的活性。EDTA-freeProteCEASE型不会影响使用固相亲和层析的蛋白纯化，这种方便的形式具有强烈的蛋白YZ作用。

AppliChemGmbH的AEBSFhydrochlorideBioChemica通过磺酰化蛋白酶活性ZX的一个基团，不可逆地YZ凝血酶thrombin和其他一些丝氨酸蛋白酶（chymotrypsin,kallikrein,plasmin,proteinaseK,trypsin）。这种试剂是PMSF和DFP的低毒替代品，具有较高的水溶性，溶液状态的pH为酸性，所以在这种pH下，稳定性较高。

除了蛋白酶YZ剂以外，在许多研究过程中，尤其是一些制药公司和研究院在研究药理学机制的时候，需要了解蛋白磷酸化途径，因此一个重要的步骤就是准确的观察一般和特异的磷酸化状态，所以蛋白抽提的另一个重要保护过程就是对磷酸化状态的有效保护。

磷酸化的蛋白可以被非特异性的磷酸酶（例如：碱性磷酸酶），特异性的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶、酪氨酸蛋白磷酸酶或双重特异性磷酸酶去磷酸化。针对这种情况罗氏也推出了一种PhosSTOP磷酸酶YZ剂混合片（可以与complete蛋白酶YZ剂兼容），这是一种即用型的片剂，其中的一些磷酸酶YZ剂只需要纳摩尔级的量。无需花费漫长的时间寻找合适的磷酸酶，也不必繁琐的称量和混合。PhosSTOP可同时持续YZ包括酸性和碱性磷酸酶，及丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶（PP1,PP2A,PP2B）和酪氨酸蛋白磷酸酶在内的多种磷酸酶。

而且PhosSTOP可应用于多种细胞提取物中磷酸酶的YZ作用，包括对酸性和碱性磷酸酶，丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶（PP1,PP2A,PP2B）和酪氨酸蛋白磷酸酶的YZ作用。除了有效YZ目的蛋白的去磷酸化，PhosSTOP也不会影响后继的蛋白检测（例如：westernblot）或是蛋白浓度检测（例如：BCA或是Bradford）。

当然提到磷酸酶YZ剂或者蛋白酶YZ剂，一个业内公认的做得相对不错的就是默克了，它的磷酸酶YZ剂混合物是以DMSO贮存液的形式，摆脱繁琐的操作步骤，节约成本和时间，在效果方法能有效YZ剂蛋白样本中的各种磷酸酶（酸性/碱性磷酸酶、丝/苏氨酸磷酸酶、酪氨酸磷酸等），配方完全公开，便于研究人员灵活应用。

旗下产品包括：可YZ酸性磷酸酶、碱性磷酸酶及酪氨酸磷酸酶的PhosphataseInhibitorCocktailSetII，可YZ丝/苏氨酸磷酸酶及酪氨酸磷酸酶的PhosphataseInhibitorCocktailSetIII，以及可YZ丝/苏氨酸磷酸酶及碱性磷酸酶的PhosphataseInhibitorCocktailSetIV。

总而言之，在实验中适当的选择一些经过严格的质量监控的产品，想来相比较于家制的鸡尾酒而言具有更好的使用重复性，和有效性，让我们在下游应用中得到更洁净和清晰的结果。

但是这样配置溶液进行处理，有时也是颇为麻烦，而且效果可能并不好，目前有一些厂家试剂在简便操作，和YZ效果方面有不俗的表现，可以考虑在实验中选用，节约时间和便于结果分析。

比如，罗氏的Complete蛋白酶YZ剂混合片也许就能满足这种需要，这种试剂能YZ很多种不同的蛋白酶，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶及金属蛋白酶等，而且可应用于差不多所有的组织或细胞提物，包括来自动物、植物、酵母、细菌和直菌的样品。

除此之外，Complete蛋白酶YZ剂混合片所有成份都稳定和无毒，能提供安全和可靠的保护，这种混和片有不含EDTA的配方，这样就更不会影响依赖金属的蛋白的活性，并可确保有效进行一些纯化工作（如应用Poly-His）标记的蛋白）。

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