- 功能性肠道芯片的 4D 实时成像和计算模型评估蠕动如何促进肠道病原体入侵
- 举办高低温冷热试验箱技术研讨会,皓天推动行业发展
- 中科院上海光机所李青会课题组:科技解锁建盏釉面千年奥秘 | 前沿用户报道
- 和瑞家人“益”起健步走,好City啊!
- 喜报 Sciclone G3 NGSx 系列基因测序文库制备仪获批二类医疗器械注册证
- 学术会议邀请 | 山东省静脉输液治疗护理会议·潍坊
- 邀请函 | 第十四届亚太膜学会(AMS 14)
- 皓天新款高温烤箱干燥箱重磅发布,行业瞩目!
- 35℃低温喷雾干燥技术与有机溶剂喷雾干燥技术将在【第三届MAH大会】大放异彩
- 如何确定尘埃粒子计数器的采样点位?
- 实验室纯水机RO反渗透膜应该如何选择?
- 揭秘高低温试验箱的低能耗运行策略
- 恒温恒湿试验箱:压缩机的核心技术
![上海长方光学仪器有限公司](http://yiqi-oss.oss-cn-hangzhou.aliyuncs.com/aliyun/Manage/2018-07-06/20180706-2055212137.jpg)
- 来源:内容来源于网络 浏览量:160次
- 【导读】关键词:基因组文库(GenomicLibrary)构建技术服务|实验技术服务简介:世界顶尖品牌基因组文库(GenomicLibrary)构建技术服务|实验技术服务原装正品,质量保证...
关键词:基因组文库(GenomicLibrary)构建技术服务|实验技术服务
简介:世界品牌基因组文库(GenomicLibrary)构建技术服务|实验技术服务原装,质量保证,价格优惠。
基因组文库(GenomicLibrary)构建技术服务|实验技术服务pCzn1质粒+ArcticExpress宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:基因组文库(GenomicLibrary)构建技术服务|实验技术服务http://www.shi极china。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
基因组DNA文库包括了基因组所有顺序的随机克隆片段。一个好的基因组DNA文库的大小应足够大,以便包括所有的基因DNA顺序。DNA克隆片段也应足够大,其中包括整个基因、连接基因及它们稳定形式所要的侧翼顺序。为了获得高的克隆效率和较大的插入片段,λ噬菌体载体和质粒经常被使用构建基因组DNA文库。λ噬菌体文库易于操作,噬菌体载体上有多克隆位点。λ噬菌体能容纳10-50kb插入DNA,载体类型应根据所要基因组DNA的大小和用途来选择。
构建一个基因组DNA文库的基本步骤:
①分离纯化基因组DNA;
②切割DNA成合适大小的片段以用于克隆;
③载体DNA的制备;
④把基因组DNA段和载DNA连接;
⑤包装重组分子;
⑥测定入噬菌体滴度;
⑦扩增DNA文库;
⑧评估文的质量。
基因组文库构建步骤:1、载体:
l噬菌体:48.5kb,插入型(Z多可容纳9kb)、取代型(可容纳38-51kb,Z适19-20kb),EMBL,Charon粘性质粒(Cosmid):4-6kb,质粒+噬菌体的性质,可容纳大片段的外源基因,Z多可容纳46kb。酵母人工染色体克隆体系(YAC,YeastArtificialChromosomeCloningSystem)插入大小2001000kb2、载体DNA的制备:高分子量的外源DNA100-150kb载体DNA酶切反应-----载体臂的纯化-----载体脱磷处理(常用BamHI)(蔗糖密度梯度离心)(碱性磷酸酶)3、连接和包装:外源片段与两臂之间的比例,包装蛋白4、感染宿主菌:选择合适的宿主菌,LE392,NM538,NM539,KW251等5、基因组文库的保存和扩增:6、测滴度,要在106fu以上
7、保存:氯仿4℃,7%DMSO-70℃
需要注意:
(1)电泳时,要选用合适的DNALadder,以保证电泳后可以准确定位所需分子量的DNA。
(2)电泳以后,应尽量缩短用紫外光照射目标DNA的时间,否则会显著降低克隆效率。
(3)回收DNA的时候,应该要避免过度离心,以防止DNA被剪切,降低文库质量。
方法
1。将50μlBAC转化菌的培养物接种到500ml含12。5μg/ml氯霉素的LB液体培养基中,37℃震荡(280rpm)培养12到16小时。
2。2500g,4℃,离心15min,收集菌体。
3。用100ml冰预冷的STE重新悬浮细菌沉淀。按步骤2方法离心收集细菌。
4。用24ml含RNase(100μg/ml)的碱性裂解液I溶解细菌。加溶菌酶至终浓度为1mg/ml。
5。加入24ml新鲜配置的碱性裂解液II。盖紧离心瓶盖,轻轻翻转瓶子数次,使内容物完全混匀,冰裕5min。
6。加入24ml冰预冷的碱性裂解液III,盖紧瓶盖,轻轻翻转瓶子数次,使内容物完全混匀,置冰上5min。
7。15000g,4℃,离心10min,将上清转移到另一离心瓶中,弃沉淀。
8。加等体积的酚:氯仿。轻轻翻转离心瓶数次,混匀。3000g,室温离心15min。
9。将水相移至另一离心瓶中,加入等体积的异丙醇,翻转离心瓶数次,混匀。
10。15,000g,室温离心15分钟,回收核酸沉淀。
11。弃上清,用20ml70%乙醇漂洗沉淀。
12。弃乙醇,风干使乙醇挥发殆尽。
13。小心将BACDNA沉淀溶于0。2mlTE(pH8。0)中。仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
相关热词:
等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
- 2004-11-23 09:23:21
- 标签:
- 收藏(0) 赞(0) 踩(0)
-
随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
基因组文库构建服务|实验技术服务2004-12-03 09:23:06
关键词:基因组文库(GenomicLibrary)构建服务|实验技术服务简介:世界顶尖品牌基因组文库(Gen
-
基因组文库构建|实验技术服务2004-12-03 09:23:06
关键词:基因组文库(GenomicLibrary)构建|实验技术服务简介:世界顶尖品牌基因组文库(Genom
-
酵母双(单)杂交cDNA文库构建技术服务|实验技术服务2004-11-23 09:23:21
关键词:酵母双(单)杂交cDNA文库构建技术服务|实验技术服务简介:世界顶尖品牌酵母双(单)杂交cDNA文库
-
酶联免疫吸附测试实验(ELISA试剂盒)技术服务2004-07-16 10:28:52
酶联免疫吸附测试实验(ELISA方法)技术服务: 酶联免疫吸附测定法(ELISA) 是将已知抗原
-
消防技术服务机构设备配备GA1157-20142004-11-22 09:23:07
GA1157-2014消防设施维护保养检测消防设施北京新宇胜利仪器有限责任公司依据《GA1157-2014消
-
消防保养设备GA1157-2014消防技术服务机构设备2004-11-22 09:23:07
消防设施维护保养检测设备北京新宇胜利仪器有限责任公司依据《GA1157-2014消防技术服务机构设备配备》研
-
酶联免疫(ELISA)技术服务|实验技术服务2004-11-23 09:23:19
关键词:酶联免疫(ELISA)技术服务|实验技术服务简介:世界顶尖品牌酶联免疫(ELISA)技术服务|实验技
-
酶联免疫(ELISA)服务|实验技术服务2004-11-23 09:23:19
关键词:酶联免疫(ELISA)服务|实验技术服务简介:世界顶尖品牌酶联免疫(ELISA)服务|实验技术服务原
-
酶联免疫(ELISA)|实验技术服务2004-11-23 09:23:19
关键词:酶联免疫(ELISA)|实验技术服务简介:世界顶尖品牌酶联免疫(ELISA)|实验技术服务原装正品,
-
抗体定制服务|实验技术服务2004-11-23 09:23:21
关键词:简介:世界顶尖品牌原装正品,质量保证,价格优惠。抗体定制|实验技术服务pCzn1质粒+ArcticE
基因组文库(Genomic Library)构建技术服务
-
您可能感兴趣
![](https://static.yiqi.com/Pingce/img/imgddd.png)
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi