人总胆汁酸TBA含量测定ELISA试剂盒操作方法

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【导读】人总胆汁酸TBA含量测定ELISA试剂盒用于测定人血清，组织及相关液体样本中总胆汁酸(TBA)的含量。操作方法：标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中...

人总胆汁酸TBA含量测定ELISA试剂盒用于测定人血清，组织及相关液体样本中总胆汁酸(TBA)的含量。操作方法：

标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在diyi、第二孔中分别加标准品100μl，然后在diyi、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从diyi孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为300μg/L，200μg/L，100μg/L，50μg/L，25μg/L）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

GenericName：HumanTotalbileacid(TBA)ELISAKit

Assayprocedure

1.DiluteandaddsampletoStandard:set10StandardwellsontheELISAplatescoated,addStandard100μltothefirstandthesecondwell,thenaddStandarddilution50μltothefirstandthesecondwell,mix;takeout100μlformthefirstandthesecondwellthenaddittothethirdandtheforthwellseparately.thenaddStandarddilution50μltothethirdandtheforthwell,mix;thentakeout50μlfromthethirdandtheforthwelldiscard,add50μltothefifthandthesixthwell,thenaddStandarddilution50μltothefifthandthesixthwell,mix;takeout50μlfromthefifthandthesixthwellandaddtotheseventhandtheeighthwell,thenaddStandarddilution50μltotheseventhandtheeighthwell,mix;takeout50μlfromtheseventhandtheeighthwellandaddtotheninthandthetenthwell,addStandarddilution50μltotheninthandthetenthwell,mix,takeout50μlfromtheninthandthetenthwelldiscard(addSample50μltoeachwellafterDiluting,(density:300μg/L，200μg/L，100μg/L，50μg/L，25μg/L)

2.addsample：Setblankwellsseparately(blankcomparisonwellsdon’taddsampleandHRP-Conjugatereagent,othereachstepoperationissame).testingsamplewell.addSampledilution40μltotestingsamplewell,thenaddtestingsample10μl(samplefinaldilutionis5-fold),addsampletowells,don’ttouchthewellwallasfaraspossible,andGentlymix.

3.Incubate:AfterclosingplatewithClosureplatemembrane,incubatefor30minat37℃.

4.Configurateliquid:30-fold(or20-fold)washsolutiondiluted30-fold(or20-fold)withdistilledwaterandreserve.

5.washing：UncoverClosureplatemembrane,discardLiquid,drybyswing,addwashingbuffertoeverywell,stillfor30sthendrain,repeat5times,drybypat.

6.addenzyme：AddHRP-Conjugatereagent50μltoeachwell,exceptblankwell.

7.incubate：Operationwith3.

8.washing：Operationwith5.

9.color：AddChromogenSolutionA50ulandChromogenSolutionBtoeachwell,evadethelightpreservationfor15minat37℃

10.Stopthereaction：AddStopSolution50μltoeachwell,Stopthereaction(thebluecolorchangetoyellowcolor).

11.assay：takeblankwellaszero,Readabsorbanceat450nmafterAddingStopSolutionandwithin15min.

上海华壹生物科技有限公司
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2004-11-27 09:40:25

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