人雌二醇(E2)酶联免疫实验原理及操作方法

人雌二醇(E2)酶联免疫实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人雌二醇(E2)水平。用纯化的人雌二醇(E2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雌二醇(E2)，再与HRP标记的雌二醇(E2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌二醇(E2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人雌二醇(E2)浓度。
人雌二醇(E2)酶联免疫操作方法
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
80pmol/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
40pmol/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
20pmol/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
10pmol/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
5pmol/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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